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小胞輸送に関わる新規VHSドメイン蛋白分子群によるウイルス増殖制御

通过参与囊泡运输的新型 VHS 结构域蛋白分子控制病毒生长

基本信息

批准号：
16659118
负责人：
菅村和夫
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウイルスの細胞内侵入から成熟ウイルスの放出に至る一連のウイルス増殖過程における宿主小胞輸送の関与を検討する目的で、小胞輸送関連蛋白STAM1,STAM2およびHrsの機能解析を行った。STAM1/2ダブル欠損マウスおよびHrs欠損マウスから調整した不死化繊維芽細胞株を用いて、MCMVの感染から放出に至る過程を検討した。STAMダブル欠損細胞と遺伝子戻し細胞を比較したところ、ウイルス吸着には差異が認められなかったものの感染後48および72時間後において培養上清中のウイルス量が欠損細胞において約50分の1に減少していた。ウイルス増殖の異常が遺伝子を戻したことにより回復したのか否かさらに検証する目的で、各遺伝子に対するsiRNAを導入した。その結果siRNAにより放出されるウイルス量が再度低下した。したがってSTAMsはMCMVの増殖および放出過程に重要な働きをしていた。MCMV初期遺伝子の発現レベルを定量したところSTAMダブル欠損細胞と戻し細胞の間に大きな差異は認めなかったのものの、感染72時間後においてウイルスエンベロープおよびカプシド蛋白の発現、ウイルスゲノム発現において、STAMダブル欠損細胞での低下がみられた。さらにHrs欠損細胞を用いてMCMVの増殖を検討したところSTAMダブル欠損と同様にウイルス産生が低下していた。今後、MCMV蛋白合成、複製の過程において小胞輸送が機能しているかさらに検討する必要がある。一方で、エンベロープ非保有ポリオウイルスの増殖制御におけるSTAMsの関与を検討する目的で各細胞株にポリオウイルス受容体PVRを発現させ、ポリオウイルス感染と増殖を検討した。その結果、培養上清中および細胞中のいずれもウイルス量に変化が認められず、STAMsの関与はないことが分かった。

The cell invades into the cell, the mature cell is released to the host cell, and the host cell delivers the protein STAM1,STAM2 to the target cell. The Hrs machine can analyze the target protein. STAM1/2 infection is not necessary. Hrs is not required. The whole cell line of immortalized germ cells is used, and MCMV infection is released to the process of infection. After 48 and 72 hours of infection, the amount of STAM in the supernatant of the supernatant was about 50 minutes less than that in the supernatant. Please tell me that you are not interested in the purpose, and that each child is responsible for siRNA entry. The results showed that the amount of siRNA decreased again. This is an important step in the process of STAMs MCMV colonization. In the early stage of MCMV, it was found that there was a significant difference in the quantity of STAM in the early stage of the infection, and that in the early stage of, there was no change in the number of cells in the early stage of the virus. The results showed that after 72 days of infection, the positive rate of protein was detected, and that of STAM was detected. Use the word "MCMV" to colonize the cell "STAM". "to give birth to a low cell." In the future, the process of MCMV protein synthesis and replication is very important. One side, one side, the other, the other, the host, the host, the STAMs, the recipient, the recipient, the recipient and the recipient. The results showed that the cells in the supernatant were divided into three groups: the concentration of STAMs, the concentration of DNA and the concentration of DNA in the supernatant.