トランスポゾンを用いた結核菌由来新規免疫誘導遺伝子の同定

使用转座子鉴定来自结核分枝杆菌的新型免疫诱导基因

• 批准号: 17659145
• 负责人: 竹森 利忠
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659145/
• 关键词: 免疫学; 感染症; 抗酸菌

結核菌による感染やBCG接種は、死菌や菌構成成分の投与と比較して強力で、かつ長期にわたる免疫応答を宿主に引き起こす。生菌による免疫誘導は、宿主内に侵入した生菌の遺伝子発現に依存するものと考えられるが、未だその分子機構は不明である。本研究は、挿入配列として既知のマウスT細胞特異的抗原ペプチドをコードするトランスポゾンを挿入した非結核抗酸菌Mycobacterium fortuitum変異株をスクリーニングし、最終的には宿主免疫応答を促進するのに必要な結核菌遺伝子を同定することを目的とした。ハイスループットを実現するためには、多数のマウスCD8陽性T細胞特異的抗原ペプチドを必要とする。このため、1)抗原に対するT細胞交差反応がなく、2)抗原間の競合が起こらず、3)特異的免疫反応がほぼ同程度に誘導され、4)DNA配列間においても特異性を維持する、ペプチド群のデータベースを作成した。対象とされるペプチドをM.fortuitumのコドン読み枠に変換したDNA(tag)を含むトランスポゾン配列を抗酸菌で分泌させるため、Ag85BシグナルペプチドをコードするDNAとともに大腸菌-抗酸菌シャトルベクターpMV261に挿入し、大腸菌内で増殖させた後、精製した。今後、異なるペプチドを発現するM.fortuitum変異株ライブラリーを作製、プールしマウスに感染させる。個々の変異株の感染が成立しているか否かは、tagを検出することにより評価する。さらに、ペプチド特異免疫を誘導して変異株を宿主より排除させ、この効果をtagの検出で評価し、宿主免疫誘導に障害を持つ変異株のトランスポゾン挿入部位を同定することによって、宿主免疫を修飾する新規抗酸菌遺伝子を同定する予定である。

TB infection, BCG vaccination, administration of dead bacteria and bacterial components, strong, long-term immune response, host induction The immune induction of bacteria, the invasion of host cells, the development of bacteria and their molecular mechanisms are unknown. This study aimed to identify the necessary TB antigens for host immune response enhancement by cloning and sequencing known T cell-specific antigens into non-tuberculous strains of Mycobacterium fortuitum. Most CD8-positive T cell specific antigens are necessary for the development of T cell disease. These include: 1) antigen-specific T cell interaction; 2) antigen-specific interaction; 3) induction of specific immune responses; 4) maintenance of specificity among DNA sequences; and 3) creation of specific responses among DNA populations. For example, the DNA(tag) of M.fortuitum contains the DNA sequence of M.fortuitum, the DNA sequence of Ag85B, the DNA sequence of M. fortuitum, the DNA sequence of M. In the future, if mutant strains of M.fortuitum are discovered, they will be produced and infected. The infection of each mutant is established, and the tag is detected. In addition, specific immunity induction, host exclusion, detection of the tag of the fruit, evaluation of host immune induction, maintenance of the entry site of the mutant, identification of the site of host immune modification, identification of the new acid-resistant bacterial vector.