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リードスルー療法:栄養障害型表皮水疱症の新規治療戦略

通读疗法：大疱性表皮松解症合并营养障碍的新治疗策略

基本信息

批准号：
18659315
负责人：
澤村大輔
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

表皮水庖症は生下時から,軽微な外力で容易に水庖を生ずる疾患群である。表皮水庖症の中で,頻度が比較的高く,症状が重篤であるのが,重症の劣性栄養障害型である。本症は基底膜にあるVII型コラーゲンの発現が全くなく,特にQOLが障害され,予後が不良のため,治療法の開発が急務である。本研究の目的は,アミノグリコシド系抗生剤を本症患者の病変部に局所投与することにより,早期終止コドンのリードスルーを誘導し,VII型コラーゲン全長の翻訳が可能になる新規治療法を開発することにあった。日本人劣性栄養障害型表皮水庖症でのホットスポット変異であるE2857Xの変異部を含むDNA断片をPCRで増幅した。次に,その下流にβガラクトシダーゼ(βgal)とgreen fluorescence protein(GFP)遺伝子を組み込み,発現ベクターを作成する。そのキメラ遺伝子を表皮細胞株に導入にして,stableの細胞株を確立した。その培養細胞株に上記した抗生剤の濃度を振って添加すると,βgalやGFPの発現上昇が認められ,リードスルー療法が可能であることが示唆された。患者の表皮細胞に,種々のアミノグリコシド系抗生剤を種々の濃度で添加した。リードスルー現象にて,終止コドンを越え,回復してくるVII型コラーゲンの発現を,遺伝子レベルはRT-PCRとノーザンプロットで,検出した。最後に,患者の細胞を無免疫動物に移植して患者皮膚を構築し,そこに抗生剤を投与すると,基底膜にVII型コラーゲンの発現を見た。以上より,本治療の有用性が示された。

Epidermal water disease is born when, small external force is easy to be born water disease group. Epidermal water fever in the middle, the frequency is relatively high, the symptoms are serious, severe and poor nutrition damage type. This disease is the basement membrane, type VII, and the development of treatment is urgent, especially QOL. The aim of this study is to develop new therapeutic approaches for early termination of the disease by using antibacterials for the treatment of type VII disease. The DNA fragment of E2857X gene was amplified by PCR. Secondly, β (βgal) and green fluorescence protein(GFP) genes are combined downstream of the company to discover the creation of the event. A stable epidermal cell line was established after introduction of the virus. The expression of βgal GFP in cultured cell lines increased when the concentration of antibiotics was increased, indicating that treatment was possible. The concentration of the antibiotic in the epidermal cells of the patient was increased. In the case of a variety of phenomena, the termination of the virus is more likely to occur, and the recovery of the virus is likely to occur. Finally, the cells of the patient were transplanted into the non-immune animal, and the patient's skin was constructed, and the antibiotic was administered, and the basement membrane type VII was discovered. The usefulness of this treatment is demonstrated above.