子宮内発育不全発症機序に関する分子生物学的研究-妖精症をモデルとして

宫内生长受限发病机制的分子生物学研究——以仙女病为模型

• 批准号: 07670830
• 负责人: 藤枝 憲二
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670830/
• 关键词: Leprechaunism(妖精症); インスリン受容体遺伝子; 部位特異的変異導入; 自己リン酸化能

I)同定されたインスリン受容体コドン87のLeucineからProlineへの変異がインスリンの生物学的作用に影響を及ぼすかどうか検討するため我々は異常インスリン受容体(Pro87IR)cDNA発現ベクターを構築し、NIH3T3細胞へ遺伝子導入し、stable cloneを得、正常型インスリン受容体(Leu87IR)と比較した。(1)[_<35>S]methionineによるmetabolic labelingによりPro87IRは、proreceptorのdimer化に遅れを認めるが、cell surface biotinylationでは細胞表面にα,β-subunitとして認められるため、細胞内輸送には大きな影響を及ぼさないことが示された。(2)Scatchard plot解析によりPro87IRのインスリン結合親和性はLeu87IRの約15%に低下し、dissociation kineticsにおいてもインスリンのPro87IRからの解離は亢進し、Pro87IRにおけるインスリン結合親和性の低下が確認された。(3)Pro87IRβ-subunitのインスリン刺激による自己リン酸化は、Leu87IRに比べ低下しており、インスリンの生物学的作用の減弱を来していると考えられた。II)受容体におけるコドン87の機能を解析するために同部位のsite-directed mutagenesisを施行した。(1)変異型インスリン受容体(Ile87,Val87,Ala87IR)cDNA発現ベクターを構築し、NIH3T3細胞に遺伝子導入し、stable cloneを得た。(2)cell surface biotinylationにより各変異型受容体が細胞膜表面に到達することを確認した。(3)Scatchard plot解析により、Ile87,Val87IRでは結合親和性がLeu87IRの約4倍に、Ala87IRでは約15%に低下しており、dissociation kineticsにおいても、Ile87,Val87IRではインスリンの解離の遅延が、Ala87IRでは解離の亢進が認められた。(4)各変異受容体の自己リン酸化は結合親和性に比例し、Ile87,Val87IRでは濃度依存性に増加し、Ala87IRでは低下していた。以上から、コドン87はインスリン結合に直接結合しており、さらに同部位にはLeuのγ-branched side chainよりもIle,Valのβ-branched side chainの方が適していることが示された。

I) to determine the function of biology in Leucine, Proline, cDNA, NIH3T3, stable clone, normal, negative, negative (1) [_ & lt;35>S] methionine, metabolic labeling, Pro87IR, proreceptor, dimer, cell surface biotinylation, β-subunit, cell surface, cytosol, cytoskeleton, and so on. (2) Scatchard plot analysis showed that 15% of the total Leu87IR was low, dissociation kinetics was low, Pro87IR was high, Pro87IR was negative, and sexual depression was confirmed. (3) Pro87IR β-subunit stimulation stimulates the acidification of oneself, the Leu87IR is lower, the biological function is weak, and the biological function is weak. II) the receptive body can be used to analyze the site-directed mutagenesis in the same position. (1) the Ile87,Val87,Ala87IR cDNA shows that there is no infection in the cells of the NIH3T3 cells, and that the cells of the ADR cells are infected and the cells of the recipient stable clone are infected. (2) the surface of the membrane of each type of recipient was confirmed by cell surface biotinylation. (3) Scatchard plot analysis, Ile87,Val87IR combination and sexual Leu87IR analysis are about 4 times, Ala87IRU is about 15% low, dissociation kinetics is sensitive, Ile87,Val87IR is sensitive, and Ala87IR is active. (4) the proportion of each recipient was determined by the combination of acidification and sex ratio, the degree of dependence of Ile87,Val87IR was increased, and the concentration of Ala87IR was low. The combination of the above

项目成果

中江 淳: "インスリン受容体コドン87番目のインスリン結合における機能解析" 分子糖尿病学. (in press).

Jun Nakae：“胰岛素受体密码子 87 处胰岛素结合的功能分析”《分子糖尿病学》（出版中）。

Nakae.J: "Replacement of leucine 87 in human insulin recejtor clter affinity for insulin" J.Biol Chem. 270. 22017-22022 (1995)

Nakae.J：“在人胰岛素受体细胞对胰岛素的亲和力中替换亮氨酸 87”J.Biol Chem。