周生期脳障害の抑制効果を示す機能性糖鎖の同定と作用機序の解析

对围产期脑部疾病具有抑制作用的功能性糖链的鉴定及其作用机制的分析

• 批准号: 14657260
• 负责人: 大平 敦彦
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657260/
• 关键词: 脳障害; プロテオグリカン; コンドロイチン硫酸; 神経系前駆細胞; FGF-2; 細胞増殖; 脳損傷; 虚血; 低酸素; 細胞内骨格タンパク; 神経前駆細胞; ホスファカン; 新生児; NGC

本研究の目的は、プロテオグリカン、特にそのコンドロイチン硫酸(CS)糖鎖を利用して、周生期脳障害の新たな早期治療法への道を拓くことである。この目的に向かって、本年度は、以下の成果を上げた。1.コンドロイチン硫酸による神経系前駆細胞の機能調節神経系前駆細胞のニューロスフェアー培養系に、FGF-2と共に種々の市販CS標品を添加したところ、CS-BおよびCS-Eがヘパリンやヘパラン硫酸と同程度の増殖促進効果を持つことを発見した。さらに、驚くべきことに、神経系前駆細胞に富む胎生14日ラット胎仔脳由来のCS標品にも、FGF-2依存性の神経系前駆細胞の増殖を促進する活性が認められた。このCS標品は、CS-B由来の二糖単位(B-unit)を約5%、CS-E由来の高硫酸化二糖単位(E-unit)を2%弱含む。このことから、これら二糖単位が構成する機能領域が、胎仔脳由来のCSには存在することが示唆された。2.コンドロイチン硫酸機能領域の検索CS-BおよびCS-E多糖鎖中の、神経系前駆細胞増殖促進活性領域を同定することを目指して、CS-Bを亜硝酸/ヒドラジン分解により、また、CS-Eを精巣性ビアルロニダーゼ消化により、分子サイズの異なるオリゴ糖を調製した(弘前大学・高垣啓一教授による)。いずれのオリゴ糖も、FGF-2の活性を増強しなかった。一方、CS-BとFGF-2存在下で、CS-B由来オリゴ糖を添加した場合、二糖画分がCS-B多糖によるFGF-2の活性増強を抑制した。また、CS-EおよびFGF-2存在下で、CS-E由来オリゴ糖を添加した時には、六糖および四糖画分がCS-E多糖によるFGF2の活性増強を抑制した。この結果から、FGF-2依存性の細胞増殖を促進するためには、CS-BとCS-Eは多糖であることが心要である。しかし、その活性発現に必須な機能領域は、二〜六糖程度の低分子と思われる。

は の purpose, this study プ ロ テ オ グ リ カ ン, に そ の コ ン ド ロ イ チ ン sulfate (CS) sugar lock を using し て, Zhou Sheng 脳 handicap of の new た な early therapy へ の way を billiton く こ と で あ る. The に objective に is directed to the って, the って of the current year, and the following を results を げた. 1. コ ン ド ロ イ チ ン sulfate に よ る 経 is の 駆 cells function adjustment before god 経 department before 駆 cells の ニ ュ ー ロ ス フ ェ ア ー cultivate に, FGF - 2 on a total of に と 々 の city vendor CS standard added を し た と こ ろ, CS - B お よ び CS - E が ヘ パ リ ン や ヘ パ ラ ン sulfate と の raised the same extent colonization promote unseen fruit を hold つ こ と を 発 see し た. さ ら に, く べ き こ と に 駆 cells before, god 経 に rich む viviparous 14 ラ ッ ト tire tsai 脳 origin の CS standard product に も, FGF - 2 dependency の 経 is の 駆 cells before god raised colonization を promote す が る activity recognition め ら れ た. <s:1> the standard product of <s:1>, CS-B is derived from the 単 position (B-unit) of <s:1> disaccharide を about 5%, CS-E is derived from the 単 position (E-unit) of <s:1> high disaccharide sulfate を2%, and weakly contains む. こ の こ と か ら, こ れ ら disaccharide 単 position が formed す が る function field, tire seed 脳 origin の CS に は exist す る こ と が in stopping さ れ た. 2. コ ン ド ロ イ チ ン sulfuric acid functional areas の 検 cable CS - B お よ び CS - E polysaccharide in the lock の, god 経 駆 cells raised before colonization を promote active field with constant す る こ と を refers し て, CS - B を 亜 nitrate / ヒ ド ラ ジ ン decomposition に よ り, ま た, CS - E を fine 巣 ビ ア ル ロ ニ ダ ー ゼ digestion に よ り, molecular サ イ ズ の different な る オ リ ゴ Sugar を modulated た(Professor Keiichi taagaki, Hirosaki university による). Youdaoplaceholder0 ずれ リゴ リゴ リゴ sugar <s:1>, FGF-2 <s:1> activity を enhanced な な った った. One party, the CS - B と で, CS in the presence of FGF - 2 - B origin オ リ ゴ を add sugar し た occasions, disaccharide points が CS - B polysaccharide に よ る FGF - 2 の inhibition し raised strong を た. ま た, CS - E お よ び で, CS in the presence of FGF - 2 - E origin オ リ ゴ を add sugar し た when に は, six sugar お よ び four sugar painting points が CS - E polysaccharide に よ る FGF2 の inhibition し raised strong を た. こ の results か ら, FGF - 2 dependency の cells raised colonization を promote す る た め に は, CS - B と CS - E は polysaccharide で あ る こ と が to で あ る. The active development of に must be in the な functional field, with the degree of diosaccharide to hexose <s:1> low molecular weight と and われる.

项目成果

Kazunori Sango 他: "Phosphacan and neurocan are repulsive substrata for adhesion and neurite extension of adult rat dorsal root ganglion ---"Experimental Neurology. 182(1). 1-11 (2003)

Kazunori Sango 等人：“磷酸聚糖和神经聚糖是成年大鼠背根神经节粘附和神经突延伸的排斥基质 ---”实验神经学 182(1)。

Masaru Inatani et al.: "Spatiotemporal expression patterns of N-syndecan, a transmembrane heparan sulfate preteoglycan, in developing retina"Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41(5). 1616-1621 (2002)

Masaru Inatani 等人：“N-syndecan（一种跨膜硫酸乙酰肝素前多糖）在视网膜发育中的时空表达模式”调查眼科

Seiji Miyata 他: "Activity-dependent downregulation of a chondroitin sulfate proteoglycan 6B4 phosphacan/RPTPβ in the hypothalamic ---"Neuroscience. (in press). (2004)

Seiji Miyata 等人：“下丘脑中硫酸软骨素蛋白聚糖 6B4 磷酸聚糖/RPTPβ 的活性依赖性下调 ---”神经科学（2004 年出版）。

Kazunori Sango et al.: "Phosphacan and neurocan are repulsive substrates for adhesion and neurite extension of adult rat dorsal root ganglion neurons in vitro"Experimental Neurology. (in press). (2003)

Kazunori Sango 等人：“磷酸聚糖和神经聚糖是体外成年大鼠背根神经节神经元粘附和神经突延伸的排斥底物”实验神经学。

Takahisa Koga 他: "Expression of glycosaminoglycans during development of the rat retina."Current Eye Research. 27(2). 75-83 (2003)

Takahisa Koga 等人：“大鼠视网膜发育过程中糖胺聚糖的表达”。Current Eye Research 27(2) 75-83 (2003)。