金属-ポドフイロトキシン関連錯体による塩基特異的DNA切断反応

金属鬼臼毒素相关复合物的碱基特异性 DNA 裂解反应

• 批准号: 04225105
• 负责人: 桜井 弘
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04225105/
• 关键词: 生物無機化学; ポドフィロトキシン; 金属錯体; 塩基特異的DNA切断; 紫外線照射; 活性酸素; 電子スピン共鳴(ESR)

前年の成果を踏まえて、本年度は、ポドフィロトキシン関連化合物として、シリンガ酸(SA)およびデメチルエピポドフィロトキシン(DEPD)の選び、これらの銅(II)錯体によるDNA切断反応を検討した。まず、アガロースゲル電気泳動法によりM13mp18ssDNAを用いて、銅錯体によるDNA切断反応が生ずること、及び銅(II)単独又は薬物単独ではDNA切断は生じないことを確認した。次に、同じ系によりポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いてシークエンス反応をおこなった。その結果、SAーおよびDEPDー銅錯体によりDNA切断反応は塩基特異的に生じていること見い出した。すなわち、同系によるDNA切断反応は、シトシン(C)部位で切断が優先的に生じていることが明かとなった。また、チミン(T)やグアニン(G)部位においても切断が見られたが、C部位と比較するとその程度は低かった。アデニン(A)部位ではDNA切断はほとんど生じていないことが判った。次に、ポドフィロトキシンに鉄(III)を共存させ、紫外線照射を行うとDNA切断反応が増大し、かつ反応中に・OHの生成が認められるため、本反応における酸化生成物の同定を試みた。反応を行った後、薄層クロマトグラフィー及び液体クロマトグラフィーにより化合物を分離精製し、NMRを用いて構造解析を試みたところ、現在、4種の化合物を同定することができた。しかし、まだ十分量を得ることが困難であるため、詳細な物性やDNA切断反応を行っていない。この検討を続け、十分量得ること、さらに未同定の化合物の構造決定を行いたいと考えている。これらの知見により、詳細な紫外線照射下における活性酸素生成に関する考察を行うことを計画している。

The results of the previous year have been reviewed. This year, the selection of related compounds such as copper (II) and copper (SA) and copper (DEPD) has been reviewed. The DNA cleavage reaction of M13 mp18 ssDNA was confirmed by electrophoresis, copper (II) and copper (III) alone. In the second place, the same system is used for electric swimming. As a result, SA and DEPD are not compatible with DNA cleavage. DNA cleavage at the site C is preferred to DNA cleavage at the site C. The degree of separation is lower than that of separation. The DNA was cut off at the site A. In addition, the blue shift of iron (III), ultraviolet irradiation, DNA cleavage reaction, OH generation, and acidification products were also studied. The separation and purification of the four compounds were carried out by TLC and NMR. The DNA is cut off in detail. The structure of these compounds is determined in the middle of the study. The study of the relationship between the production of active acids under ultraviolet irradiation and the development of new research projects

项目成果

桜井 弘編集: "バイオサイエンスESR" 廣川書店, 600 (1993)

樱井宏编：《Bioscience ESR》广川书店，600（1993）

桜井 弘,田中 英彦編集: "生体微量元素" 廣川書店, 500 (1993)

樱井浩和田中英彦主编：《生物微量元素》广川书店，500（1993）