核タンパク質の核内移行を阻害する抗体を用いた細胞増殖シグナル伝達因子の解析

使用抑制核蛋白入核的抗体分析细胞增殖信号转导因子

• 批准号: 05269214
• 负责人: 米田 悦啓
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05269214/
• 关键词: 核局在化シグナル; ストレス蛋白質; GTP結合蛋白質; 細胞周期; シグナル伝達; 核蛋白質輸送; 細胞融合

これまでに本研究者は、ストレスタンパク質の1つであるhsc70が核タンパク質の核内移行に必要であることを証明してきたが、本研究において、hsc70以外に核タンパク質輸送に必要と考えられる因子の解析に精力を注いだ。セミインタクト細胞in vitro系を用いて重要性が示唆されている、低分子量GTP結合タンパク質であるRan/TC4(主として核内に存在するGタンパク質として同定されたもの)に注目した。ハムスターの細胞株であるBHK細胞の温度感受性突然変異株であるtsBN2細胞(九州大学の西本が樹立。Ran/TC4に働きかけ、GDP結合型をGTP結合型に変換させるように働くタンパク質であるRCC1に変異がある。)を利用した。この細胞を非許容温度下で培養を続けると、核タンパク質の輸送能が低下していくことが明かとなり、RCC1-Ran/TC4系が細胞内で核タンパク質の輸送を制御していることをin vivo系で初めて証明した。さらに、tsBN2細胞と野生型のBHK細胞をセンダイウィルスを用いて融合させてから、非許容温度下での核タンパク質の輸送能を解析したところ、融合直後では、tsBN2細胞の核には核タンパク質の輸送は阻害されるが、野生型のBHK細胞の核への核タンパク質の輸送はほとんど正常通りおこった。このことから、RCC1-Ran/TC4系が核、おそらく核膜のレベルで核タンパク質の輸送を制御していることが示唆される。また、融合後しばらくすると、tsBN2細胞の核ばかりでなくBHK細胞の核もまた核タンパク質の輸送が起こらなくなってくることから、RCC1-Ran/TC4系が細胞質から何らかの阻害的作用をすることが示唆され、RCC1-Ran/TC4系の複雑な制御機構の存在が明かとなった。このような制御系が実際に細胞周期の制御にも働いている可能性は大きく、細胞周期や細胞増殖の研究に与える影響は大きいと考えられる。

This study was conducted to examine the factors necessary for nuclear mass transport beyond hsc 70. The importance of low molecular weight GTP binding in vitro systems is noted. The temperature sensitivity of BHK cells suddenly changed to tsBN2 cells (Kyushu University Nishimoto). Ran/TC4 is a GDP-bound variant. Use it. The cell culture at non-allowable temperature showed that the nuclear transport energy was low, and the RCC1-Ran/TC4 line showed that the nuclear transport energy was low in vivo. In addition, tsBN2 cells and wild-type BHK cells were fused in the middle of the fusion process, and nuclear protein transport energy was analyzed at non-allowable temperatures. After fusion, tsBN2 cells were blocked in nuclear protein transport, and wild-type BHK cells were blocked in nuclear protein transport. RCC1-Ran/TC4 is a nuclear, nuclear membrane and transport control system. The nuclear transfer of tsBN2 cells after fusion and RCC1-Ran/TC4 cell line plays an important role in the inhibition of cytoplasmic transfer. The existence of a complex control mechanism in RCC1-Ran/TC4 cell line is also demonstrated. The possibility of cell cycle control is very high, and the influence of cell cycle control is very high.

项目成果

Yoshihiro Yoneda: "Methods in Enzymology(vol.221)" Academic Press,Inc., 462 (1993)

米田义弘：《酶学方法（第 221 卷）》学术出版社，462（1993）

Yumiko Okuno: "70-KDa heat-shock cognate protein colocalizes with karyophilic proteins into the nucleus during their transport in vitro." Experimental Cell Research. 206. 134-142 (1993)

Yumiko Okuno：“70-KDa 热休克同源蛋白在体外运输过程中与亲核蛋白共定位到细胞核中。”

Yosuke Matsuoka: "Exogenous histone H1 injection into mitotic cells disrupts synchronous progression of mitotic events by delaying chromosome decondensation." Journal of Cell Science.(in press).

Yosuke Matsuoka：“将外源组蛋白 H1 注射到有丝分裂细胞中，通过延迟染色体去浓缩来破坏有丝分裂事件的同步进程。”

Keiko Kato: "Use of the hemagglutinating virus of Japan(HVJ)-liposome method for analysis of infiltrating lymphocytes induced by hepatitis B virus gene expression in liver tissue." Biochimica et Biophysica Acta. 1182. 283-290 (1993)

Keiko Kato：“使用日本血凝病毒（HVJ）脂质体方法分析肝组织中乙型肝炎病毒基因表达诱导的浸润淋巴细胞。”

米田悦啓: "核タンパク質輸送の分子メカニズム" 細胞(ニュー・サイエンス社). 25. 390-395 (1993)

Etsuhiro Yoneda：“核蛋白转运的分子机制”细胞（新科学）25。390-395（1993）。