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ゲノム情報を利用した転写因子の標的遺伝子単離法の開発

利用基因组信息开发转录因子靶基因分离方法

基本信息

批准号：
09272216
负责人：
高橋直樹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09272216/
关键词：
転写因子標的遺伝子ゲノム線虫ホメオボックス

项目摘要

我々はマウスを用いて転写因子の抗体を用いた標的遺伝子クローン化法を開発し、Hoxの標的遺伝子群を特定してきた。その過程において、転写調節ネットワークの一部は多くの動物種において保存されていることが明らかになった。また、ゲノム配列のほとんどが明らかになっている線虫を実験材料とすれば、標的遺伝子特定の効率が飛躍的にあがる事に気がついた。そこで以下のような線虫の実験動物としての利点を活かした標的遺伝子単離法を開発した。モデル遺伝子として線虫の神経ネットワークの形成に関わるホメオボックス遺伝子unc4を用いた。この遺伝子に2種類のタグを結合したコンストラクトを作製し、unc4ミュータント個体に遺伝子導入を行った。それぞれのタグ単独でも、両方のタグを結合したコンストラクトでも、unc4フェノタイプをレスキューすることが明らかになったこと、また遺伝子導入による付加的な個体の変異が観察されないことから、タグ付き遺伝子産物は、正常蛋白と同じ(類似の)標的遺伝子群の発現調節をしていると考えられる。この個体に導入したタグ付き遺伝子産物は、タグを利用したアフィニティーカラムによって特異的に精製できることを確認した。現在タグ付き蛋白がin vivoで結合しているDNAをクローン化しており、線虫ゲノムのデータベースを用いて標的遺伝子群を特定できると考えている。

I use 々はマウスを用いて転 to write the factor のantibodies を Use the いたlabeled remaining 伝子クローン化法を开発し, and the Hoxのlabeled remaining 伝subgroup をspecific してきた.そのPROCESS において、転WRITING REGULATION ネットワークの一多くの animal species において SAVE されていることが明らかになった.また、ゲノムmatching のほとんどが明らかになっている nematode を実験 materialとすれば、にあがる事に気がついた which has a specific efficiency and a leap in target.そこでThe following のようなnematodesの実験animalsとしての利Pointをliveかしたlabeled remains 伝子単法を开発した.モデル缝子として nematode の神経ネットワークの Formation に关わるホメオボックス缝子unc4を用いた.この缝子に2 kinds of のタグをcombination of したコンストラクトをproducedし, unc4ミュータント individual に伝子 imported into を行った. Uncut 4フェノタイプをレスキューすることが明らかになったこと、また缝子 import The individual の変different が観看されないことから of the タググき伝子 Product は, Normal protein is the same as (similar to) the target of the remaining subgroups and is now regulated.このIndividual にIntroduction したタグき弝子product は、タグをutilization したアフィニティーカラムによってSpecial にRefined できることをConfirmed した.タグpayきproteinがin now Vivo's combination of DNA and nematodes The のデータベースを uses the いて mark to mark the remaining 伝 subgroups をspecific できると卡えている.