インスリンシグナル伝達における蛋白質高次構造認識機構

胰岛素信号转导中的蛋白质构象识别机制

• 批准号: 06276213
• 负责人: 蛯名 洋介
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06276213/
• 关键词: インスリン; インスリンレセプター; シグナル伝達; PI3-キナーゼ

インスリンは代謝調節、細胞増殖因子として生体必須のホルモンであり、それは細胞膜に存在するインスリンレセプターと結合することにより作用を発現する。そのシグナルがどのようにして細胞内に伝達され、最終的なターゲットに到達するか、またその病態によってどのような異常が生ずるかを解析することは重要な課題である。我が国には約500万人のインスリン非依存性(成人型)糖尿病患者がおり、それは細胞のインスリンに対する応答障害に1つの主な原因があると考えられている。インスリンは細胞表面上にあるインスリンレセプターと結合し、レセプターチロシンキナーゼが活性化されインスリンシグナルを伝達する。糖尿病の病因を明らかにするためにはこのインスリンシグナル伝達の分子機構を解明する必要がある。インスリンがそのレセプターに結合するとレセプター細胞内ドメインにあるチロシンキナーゼが活性化され、Insulin receptor substrate-1がチロシンリン酸化され、そこにSH2ドメインを介してPI3-キナーゼやGRB2が結合する。PI3-キナーゼはその結合により活性化されるが、GRB2はRasの経路を介して最終的にはMAPキナーゼを活性化する。このシグナル伝達における最初のステップはレセプターαサブユニットへのインスリンの結合であるが、その結合部位及び、結合様式は明らかになっていない。この結合には糖鎖が関与し、またαサブユニット同志でS-S結合が形成されなくてはならないため、大腸菌、バキュオウィルスの発現系は使用できない。我々は以前インスリンレセプターのαサブユニットを細胞外へ放出するCHO細胞のクローンを確立した。無血清培地を用い培養液よりWGAカラム、ハイドロキシアパタイトカラムの2ステップによりαサブユニットを精製できたが、培地10ml当たり約1μgのαサブユニットしかとれなかったため、インスリンレセプターαサブユニットとインスリンとの結合を解析するためには大量高発現系を改良する必要がある。もっと強力な発現プロモーターを用い、ヒスチジンtagをつけて精製を1ステップにし、培地1ml当たり1〜10μgのαサブユニットを精製し、高次構造解析に用いたい。

In this study, the growth of the cell membrane must be affected by the combination of the cell membrane, the cell membrane and the cell membrane. Do you want to know if you are in the cell, the most important thing is to get sick, you have to get sick, and you have to do something. There are about 5 million people in our country who are suffering from non-dependent (adult) diabetes. Patients with non-dependent (adult) diabetes are suffering from diabetes. On the surface of the cell, you need to make sure that you don't know what's going on. The etiology of diabetes is clearly known, and the molecular organization has explained that it is necessary to treat diabetes. In this study, we detected the activation of Insulin receptor substrate-1, the activation of PI3-, the acidification of GRB2, and the induction of GRB2. The combination of PI3- information and activation information, and the introduction of the most important information in the GRB2 Ras network, is called MAP activation. In the first place, you need to know how to make sure that you have a problem. You can use the combination method to show that the combination of the two parts is correct. The combination of sugar and sugar, sugar I was told that the CHO cell was released from the extracellular cell and that it was confirmed. The serum-free culture solution was used to treat WGA, and the serum-free 10ml was used in the first place in the first half of the year. In order to improve the quality of life, it is necessary to improve a large number of high temperature in combination with the analysis of the results of the analysis. In order to improve the quality of the system, we need to make sure that the tag is used, that the 1ml is used in the first place, that the 1ml is in the range of 1 ~ 10 μ g, and that it is used in high-order analysis.