インスリンシグナル伝達における蛋白質高次構造認識機構

胰岛素信号转导中的蛋白质构象识别机制

• 批准号: 07268215
• 负责人: 蛯名 洋介
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268215/
• 关键词: インスリン; インスリンレセプター; 高次構造

インスリンは標的細胞表面上のインスリンレセプターと結合することにより細胞内での情報伝達が開始される。インスリンレセプターは細胞外にあるαサブユニット(135kd)と膜貫通部位をもつβサブユニット(95kd)からなるS-S結合で結びついたヘテロテトラマ-である。インスリンはαサブユニットに結合すると細胞内βサブユニットのチロシンキナーゼが活性化され、インスリンシグナルを細胞内へ伝達する。しかしその結合部位はある1つの狭い領域に限定されず、αサブユニットのいくつかの部位がインスリン結合ポケットを形成すると考えられている。αサブユニットは糖タンパクであり、このαサブユニットにはS-S結合、糖鎖が存在するため大腸菌やバキュロウイスルの系では活性あるタンパクが産生されない。我々は、インスリンレセプターcDNAをtruncateさせ、インスリンレセプターαサブユニットのみを培養液中に放出するCHO細胞のクローンを確立している。このCHO細胞は無血清培地で浮遊細胞として培養できるので、培地中から大量精製が可能である。WGAカラム、インスリンレセプター抗体カラムを利用し、約100mlの培養液より精製したが約10μgのαサブユニットしかとれなかった。企業などとの共同研究により100リットル位のタンクで大量培養すれば10mg程度のαサブユニットはとれ、高次構造の解析も可能であると思われるが、発現ベクターを変えたり、またミエローマなどの分泌細胞を使用したりしてもっと効率の良いαサブユニット産生系を作る必要が生じた。

The インスリンは target cell surface のインスリンレセプターと combines with することにより and the information inside the cell reaches ががされる. Extracellular membrane penetration part (135kd) βサブユニット(95kd)からなるS-S combined with the knotted びついたヘテロテトラマ-である.インスリンはαサブユニットにbinds するとβサブユニットのチロシンキナーゼがactivationされ、インスリンシグナルを intracellular activationへ伝する.しかしそのjoining part はある1つの narrow area にlimited されず、αサブユニットThe のいくつかのpart がインスリン combines with the ポケットを to form the すると卡えられている. αサブユニットはsugarタンパクであり、このαサブユニットにはS-S bond、sugar lockがThe presence of Escherichia coli Escherichia coli and the activity of Escherichia coli produces Escherichia coli. 々は、インスリンレセプターcDNAをtruncateさせ、インスリンレセプIt is established that the CHO cells released in the culture medium of the α-サブユニットのみを culture medium are established. It is possible to culture CHO cells without serum and planktonic cells, and to purify them in large quantities. WGA カラム, インスリンレセプターantibody カラムをutilizationし, about 100ml Approximately 10μg of the culture medium is refined and refined. Corporate joint research and development of 100 リットルbit のタンクで mass cultivation すれば10 mg level of α-synthetic solution, high-order structure analysis and possible analysisわれるが、発行ベクターを変えたり、またミエローマなどのsecretory cell をUse the したりしてもっとefficiencyの好いαサブユニット to produce the necessary が生じた.

项目成果

Kan M.,Ebina Y.et.al.: "Frequency of mutations of insulin receptor gene in Japanese patients with NIDDM" Diabetes. 44. 1081-1086 (1995)

Kan M.、Ebina Y.et.al.：“日本 NIDDM 患者胰岛素受体基因突变频率”糖尿病。

Wang, L., Ebina, Y. et al.: "Cloning of a cDNA encoding a 190-kDa insulin receptor substrate-l (IRS-1) -like protein of simian cos cells" Biochem. Biophys. Res. Commun.216. 321-328 (1995)

Wang, L., Ebina, Y. 等人：“克隆编码猿 cos 细胞的 190-kDa 胰岛素受体底物-1 (IRS-1) 样蛋白的 cDNA”Biochem。

Ishii K.,Ebina Y.et.al.: "Possible domains responsible for intracellular targeting and insulin-dependent translocation of glucose tansporter type 4" Biochem.J.309. 813-823 (1995)

Ishii K.、Ebina Y.et.al.：“负责 4 型葡萄糖转运蛋白的细胞内靶向和胰岛素依赖性易位的可能结构域”Biochem.J.309。

Todaka, M., Ebina, Y. et al.: "Roles of insulin, guanosine 5´-O-(3-thiotriphosphate) (GTPγS) and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) in signaling pathways of GLUT4 translocation" Biochem. J. in press.

Todaka, M.、Ebina, Y. 等人：“胰岛素、鸟苷 5´-O-(3-硫代三磷酸) (GTPγS) 和佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯 (PMA) 在 GLUT4 易位信号通路中的作用”生物化学杂志出版。

Kamohara, S., Ebina, Y. et al.: "Platelet-derived growth factor triggers translocation of the insulin-regulatable glucose transporter (type 4) predominantly through phosphatidylinositol 3-kinase binding sites on the receptor" Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 9

Kamohara, S., Ebina, Y. 等人：“血小板衍生生长因子主要通过受体上的磷脂酰肌醇 3-激酶结合位点触发胰岛素调节型葡萄糖转运蛋白（4 型）的易位”Proc.