课题基金 / 基金详情

インスリンシグナル伝達における蛋白質高次構造認識機構

インスリンシグナル伝達における蛋白質高次構造認識機構
胰岛素信号转导中的蛋白质构象识别机制
批准号：
07268215
负责人：
蛯名 洋介
金额：
$1.66万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1995 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268215/
关键词：
インスリンインスリンレセプター高次構造

项目摘要

项目成果

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翻译
インスリンは標的細胞表面上のインスリンレセプターと結合することにより細胞内での情報伝達が開始される。インスリンレセプターは細胞外にあるαサブユニット(135kd)と膜貫通部位をもつβサブユニット(95kd)からなるS-S結合で結びついたヘテロテトラマ-である。インスリンはαサブユニットに結合すると細胞内βサブユニットのチロシンキナーゼが活性化され、インスリンシグナルを細胞内へ伝達する。しかしその結合部位はある1つの狭い領域に限定されず、αサブユニットのいくつかの部位がインスリン結合ポケットを形成すると考えられている。αサブユニットは糖タンパクであり、このαサブユニットにはS-S結合、糖鎖が存在するため大腸菌やバキュロウイスルの系では活性あるタンパクが産生されない。我々は、インスリンレセプターcDNAをtruncateさせ、インスリンレセプターαサブユニットのみを培養液中に放出するCHO細胞のクローンを確立している。このCHO細胞は無血清培地で浮遊細胞として培養できるので、培地中から大量精製が可能である。WGAカラム、インスリンレセプター抗体カラムを利用し、約100mlの培養液より精製したが約10μgのαサブユニットしかとれなかった。企業などとの共同研究により100リットル位のタンクで大量培養すれば10mg程度のαサブユニットはとれ、高次構造の解析も可能であると思われるが、発現ベクターを変えたり、またミエローマなどの分泌細胞を使用したりしてもっと効率の良いαサブユニット産生系を作る必要が生じた。
英文摘要
インスリンは標的細胞表面上のインスリンレセプターと結合することにより細胞内での情報伝達が開始される。インスリンレセプターは細胞外にあるαサブユニット(135kd)と膜貫通部位をもつβサブユニット(95kd)からなるS-S結合で結びついたヘテロテトラマ-である。インスリンはαサブユニットに結合すると細胞内βサブユニットのチロシンキナーゼが活性化され、インスリンシグナルを細胞内へ伝達する。しかしその結合部位はある1つの狭い領域に限定されず、αサブユニットのいくつかの部位がインスリン結合ポケットを形成すると考えられている。αサブユニットは糖タンパクであり、このαサブユニットにはS-S結合、糖鎖が存在するため大腸菌やバキュロウイスルの系では活性あるタンパクが産生されない。我々は、インスリンレセプターcDNAをtruncateさせ、インスリンレセプターαサブユニットのみを培養液中に放出するCHO細胞のクローンを確立している。このCHO細胞は無血清培地で浮遊細胞として培養できるので、培地中から大量精製が可能である。WGAカラム、インスリンレセプター抗体カラムを利用し、約100mlの培養液より精製したが約10μgのαサブユニットしかとれなかった。企業などとの共同研究により100リットル位のタンクで大量培養すれば10mg程度のαサブユニットはとれ、高次構造の解析も可能であると思われるが、発現ベクターを変えたり、またミエローマなどの分泌細胞を使用したりしてもっと効率の良いαサブユニット産生系を作る必要が生じた。
期刊论文(7)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kan M.,Ebina Y.et.al.: "Frequency of mutations of insulin receptor gene in Japanese patients with NIDDM" Diabetes. 44. 1081-1086 (1995)
Kan M.、Ebina Y.et.al.：“日本 NIDDM 患者胰岛素受体基因突变频率”糖尿病。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Wang, L., Ebina, Y. et al.: "Cloning of a cDNA encoding a 190-kDa insulin receptor substrate-l (IRS-1) -like protein of simian cos cells" Biochem. Biophys. Res. Commun.216. 321-328 (1995)
Wang, L., Ebina, Y. 等人：“克隆编码猿 cos 细胞的 190-kDa 胰岛素受体底物-1 (IRS-1) 样蛋白的 cDNA”Biochem。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Ishii K.,Ebina Y.et.al.: "Possible domains responsible for intracellular targeting and insulin-dependent translocation of glucose tansporter type 4" Biochem.J.309. 813-823 (1995)
Ishii K.、Ebina Y.et.al.：“负责 4 型葡萄糖转运蛋白的细胞内靶向和胰岛素依赖性易位的可能结构域”Biochem.J.309。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Todaka, M., Ebina, Y. et al.: "Roles of insulin, guanosine 5´-O-(3-thiotriphosphate) (GTPγS) and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) in signaling pathways of GLUT4 translocation" Biochem. J. in press.
Todaka, M.、Ebina, Y. 等人：“胰岛素、鸟苷 5´-O-(3-硫代三磷酸) (GTPγS) 和佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯 (PMA) 在 GLUT4 易位信号通路中的作用”生物化学杂志出版。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
インスリン受容体過剰発現を用いた糖尿病の未来治療の試み
  • 批准号：
    21659080
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
  • 资助金额：
    $1.92万
  • 财政年份：
    2009
  • 负责人：
    蛯名 洋介
  • 依托单位：
    The University of Tokushima
インスリン受容体細胞内ドメインは転写因子となりうるのか?
  • 批准号：
    17659085
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.11万
  • 财政年份：
    2005
  • 负责人：
    蛯名 洋介
  • 依托单位：
    The University of Tokushima
ヒト血清中に可溶性インスリンレセプターは存在するか?
  • 批准号：
    15659079
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.11万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    蛯名 洋介
  • 依托单位：
    The University of Tokushima
PDGF投与により血糖値が下がるマウスを作れるか?
  • 批准号：
    13877018
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $1.34万
  • 财政年份：
    2001
  • 负责人：
    蛯名 洋介
  • 依托单位：
    The University of Tokushima
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