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mRNA核外輸送系における熱ショック応答の分子機構

mRNA核输出系统热激反应的分子机制

基本信息

批准号：
07253217
负责人：
谷時雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、oligo-dTをプローブに用いた分裂酵母のin situ hybridizationによって、急激な熱ショック処理(42℃)が、mRNAの核から細胞質への輸送を阻害し、輸送されなかったmRNAの核小体への蓄積を誘発すること見いだした。このことは、酵母においては核小体がmRNAの核外輸送に何らかの形で関与している可能性を示唆する。また、我々が最近分離した一群のmRNA核外輪輸送変異株のうちの一つ(mrt2)において、急激な熱ショックストレスを与えたときと同様に、制限温度下で培養すると、mRNAが核小体領域に蓄積することを見いだした。mrt2を相補する遺伝子をクローニングしたところ、GTPase Ranに対するguanine nucleotide exchange factorをコードするRCCIの相同遺伝子であることが判明した。また、熱ショック蛋白をコードするmRNAの挙動を解析するため、mRNAの核外輸送を阻害する42℃で熱ショックをおこなった細胞から調製した抽出液と、hsp104に対する抗体を用いてWestern blotを行ったところ、ほとんどのmRNAの核外輸送が阻害されているにも関わらず、hsp104蛋白の発現が誘発されていることが判明した。このことは、hspのmRNAが通常の細胞mRNAの核外輸送系とは異なる機構で細胞質へと輸送されている可能性を強く示唆している。hspの発現機構に関しては、遺伝子の転写、蛋白への翻訳、mRNA安定性など色々な段階で通常のmRNAの発現機構には無い特殊性を持つことが知られており、mRNAの核から細胞質への輸送レベルにおいても、hsp mRNAに特異的な輸送機構が存在している可能性は十分考えられる。

I々は、oligo-dTをプローブに用いたsplit yeastのin situ hybridization, rapid heat treatment (42℃), mRNA core processing The transport of cytoplasm is hindered, and the transport of mRNA and nucleosomes is accumulated and induced.このことは, yeast においては nucleosome and がmRNA extranuclear transport にらかの shape で relationship and している possibility を indication する.また, I 々が recently separated した a group of のmRNA nuclear outer wheel transport 剉 different strain のうちの一つ(mrt2) において, 久久な热ショックストレスを and えたときと Same as 様に, culture under restricted temperature でると, and accumulation of mRNA in the nucleosome field することを见いだした. mrt2をphase complementする伝子をクローニングしたところ、GTPase Ranに対するguanine nucleotide exchange factorをコードするRCCIの Same as the remaining 伝子であることがdeterminationした.また、热ショックprotein をコードするmRNAの挙动をanalytics するため、mRNAの extranuclear transport をblocking する42℃でショックをおこなったcell preparation したextract solution と、hsp104 に対するantibody を Use いてWesternったところをったところ、ほとんどのmRNA extranuclear transport がblocking されているにも关わらず、hsp104 protein の発appears がinducing発されていることが clarifies した.このことは, hspのmRNA がNormally のcellular mRNA の extranuclear transport system とはdifferent なる mechanism でcytoplasm へとtransport されているpossibility をstrong くshows soso している. hspの発appears the organization is closed, the remaining parts are written, the protein is turned over, and the mRNA stability is the color of the stage. The mechanism of the present mechanism is that there is no particularity, the knowledge is maintained, the mRNA is nuclear, the cytoplasm is transported, the hsp is The possibility of the existence of a specific transport mechanism for mRNA is very high.