哺乳類細胞のDNA修復機構と細胞周期制御の連関

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DNA上に損傷が生じると細胞は、G1期やG2期で細胞周期を停止し、損傷の修復が完了するまでS期やM期へは進行しない。このことは、DNA修復と細胞周期制御をつなぐ連関機構が存在することを意味し、これを明らかにすることは重要な意義を有する。本申請者らは、クロマチン構造をとったDNAを鋳型とした無細胞DNA修復系を用いて、すでに、XPC蛋白質及びHHR23Bという新しい修復因子の複合体を同定している。これらの蛋白質は、XPCは、非常に多くのりん酸化を受けうる部位を持つこと、またHHR23Bは、そのN末領域にユビキチンと高い相同性を持つ領域があるから、細胞周期とDNA修復を結ぶ接点の一つになりうると考えられる。本年度は、これらの組み換え蛋白質を作成して解析を行った。バキュロウイルス系を用いて作成した、XPC蛋白質は、強くDNAに結合するというXPC-HHR23B複合体のもつ性質を単独で示した。また、無細胞ヌクレオチド除去修復系において、XP-C群細胞抽出液の修復欠損を相補した。しかし、XP-C群細胞抽出液中に存在する過剰のHHR23Bを除去した修復系においては、XPC蛋白質単独では、弱い相補活性しか見られず、組み換えHHR23Bの添加により修復活性は、著しく促進されたことから、両者が共存することが除去修復に重要であると考えられる。HHR23Bについては、さらに、欠失変異体を作成して解析を進めており、現在までに、N末部分のユビキチン相同領域が、無細胞修復系では、必要でないことを明かにしている。さらに、抗体を用いた解析から、XPC-HHR23Bは、核に局在することを示した。現在、さらに、細胞周期やDNA損傷による局在の変化及び修飾の変化について解析を進めめてる。