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蛋白リン酸化酵素の核内輸送機構と新しい核膜孔複合体の探求

探索蛋白激酶的核转运机制和新型核孔复合物

基本信息

批准号：
07282208
负责人：
萩原正敏
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07282208/
关键词：
カルモジュリン CaMキナーゼ核内局在

项目摘要

我々はカルシウム/カルモジュリン依存性蛋白リン酸化酵素(CaMキナーゼIV)の核内局在化機構を調べた。培養細胞COS7に遺伝子導入してCaMキナーゼIV特異的抗体を用いて、細胞内局在をしらべたところ、CaMキナーゼIIが細胞質に局在したのとは対照的に核への局在が認められた。しかしながら、200kDのCaMキナーゼIVとLacZの結合蛋白は細胞質に局在した。このことから、CaMキナーゼIVは拡散によって核へ移行していることが示唆された。一方、CaMキナーゼIV遺伝子の部分産物でありCaMキナーゼIVのカルボキシル末端169アミノ酸と相同性のあるカルスペルミンの細胞内局在を調べたところ、強い核内局在が認められた。このことは、CaMキナーゼIVのカルボキシル末端がCaMキナーゼIVの核内局在に関与していること示唆するが、カルボキシル末端の欠失変異体についても核内局在が認められた。そこで我々はCaMキナーゼIVのアミノ末端も核内局在に関与しているのではないかと仮設を立て、CaMキナーゼIIとCaMキナーゼIVそれぞれに関してAssociationドメインを欠失したミュータントを作成しCOS7に遺伝子導入してエピトープタッギング法によって細胞内局在を調べたところ、CaMキナーゼIIに関しては細胞内全体に局在したのに対して、CaMキナーゼIVに関してやはり核に局在する細胞がみられた。さらにCaMキナーゼIVのアミノ末端欠失変異体を作成し細胞内局在を調べたところ、アミノ末端から132番目のアミノ酸までを欠失させると核への局在は完全に消失した。これらの結果より、CaMキナーゼIVのカルボキシル末端はカルスペルミンの核内局在に必要であり、CaMキナーゼIVの核内局在にはアミノ末端も必要であると考えられる。

We have been working on the regulation of nuclear regulatory mechanisms in the presence of CaM IV. Cultured COS7 cells were introduced into CaM cells, and specific antibodies were used in the cytoplasm. 200kD CaM and LacZ binding proteins are present in the cytoplasm. This is the first time I've ever seen a woman. A part of the CaM gene is produced in the CaM gene. This is the first time that a nuclear power plant has been established in China. In addition, we also found that the CaM II and CaM II were not suitable for the production of COS7. The CaM II and CaM II were suitable for the production of COS 7. CaM IV is related to nuclear power generation. In addition, the cellular structure of CaM-4 was completely destroyed due to the loss of CaM-4 at the end of CaM-4. The result of this is that, CaM IV