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発癌プロモーターとプロテインキナーゼCとの結合様式の有機化学的解析

致癌启动子与蛋白激酶C结合模式的有机化学分析

基本信息

批准号：
08219224
负责人：
入江一浩
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞内情報伝達における鍵酵素であるプロテインキナーゼC(PKC)は、強力な発癌プロモーター・ホルボールエステルの主要なターゲットとして注目されている。最近、リン脂質非存在下におけるPKC調節領域の一部と水溶性ホルボールエステルとの複合体の結晶構造が報告されたが、リン脂質存在下における複合体の三次元構造は依然として不明な点が多い。本研究はこの点を明らかにするため、新規光反応性ホルボールエステルを合成し、PKCモデルペプチドに対する光アフィニティーラベリングを行った。昨年度のラットPKCγ調節領域モデルペプチド(アミノ酸残基101-151:γ-CRD2)に対する光アフィニティーラベリングにより、ホルボール骨格の12位あるいは13位にジアゾアセチル基を有するプローブがγ-CRD2を特異的に光標識できることが判明した。しかしながら、ラベル化率が低く、標識アミノ酸残基の同定は困難であった。本年度はまず、ジアゾアセチル基よりもラベル効率の高いジアジリンをホルボール骨格の12位あるいは13位に導入したプローブを合成した。同時にホルボールエステルに対して親和性の高いPKCモデルペプチドのスクリーニングも行った。その結果、マウスPKCη調節領域モデルペプチド(アミノ酸残基246-296:η-CRD2)が亜鉛でフォールディングすることにより、γ-CRD2よりも2オーダー高く、かつネイティブのPKCηに匹敵するホルボールエステル結合能(K_d=0.91nM)を示すことを見いだした。そこで、ジアジリン誘導体をトリチウム標識し、η-CRD2に対する光アフィニティーラベリングを行った。しかしながら、η-CRD2に対する標識率はγ-CRD2とほとんど変わらなかった。以上の結果より、標識アミノ酸残基を同定するためにはさらに新しいタイプの光反応性プローブの開発が不可欠であることが判明した。

Intracellular information transmission key enzyme, such as C(PKC), strong cancer transmission key enzyme, such as C(PKC), strong cancer transmission key enzyme, and so on. Recently, in the absence of lipids, part of the PKC regulatory domain is water-soluble, and the crystal structure of the complex is reported. In the presence of lipids, the three-dimensional structure of the complex is still unknown. This research is based on this point, the synthesis of new light-reflective ale ale and the development of light-reflective ale ale for PKC display options. The PKCγ regulatory domain was identified by the light source at position 12 of the PKCγ regulatory domain (residues 101-151:γ-CRD2) and by the light source at position 13 of the PKC γ regulatory domain (residues 101 - 151: γ-CRD2). The identification of acid residues is difficult due to the low conversion rate. This year, the 12-bit, 13-bit, 13-bit, 12-bit, 13-bit, 12-bit, 12-bit, 13-bit, 12-bit, 13-bit, 12-bit, 1 At the same time, it is necessary to carry out the work of the CPC Central Committee. The results showed that the PKC regulatory domain showed a high binding energy (K_d=0.91nM). For example, if a CRD2 is detected, the CRD2 is detected. The standard identification rate of η-CRD2 is γ-CRD2. The above results indicate that the development of new photoreactive species is not possible.