权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

インドール環4位への窒素原子導入酵素の触媒機構の解析と応用

吲哚环4位引入氮原子的酶催化机理分析及应用

基本信息

批准号：
20658029
负责人：
入江一浩
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20658029/
关键词：
indolactam-V teleocidin 生合成 NRPS P450 発がんプロモーター Streptomyces

项目摘要

本研究代表者らは,発がんプロモーター・テレオシジンの基本骨格であるインドラクタム-V(IL-V)を大量に産生する特異な放線菌(Streptomyces blastmyceticus NA34-17株)を用いて,IL-Vの4位セコ体であるN-methyl-L-valyl-L-tryptophanolが,IL-Vの生合成前駆体であることを明らかにした.またIL-V前駆体は,非リボソーム型ペプチド合成酵素(NRPS)によって合成されることが予想されている.昨年,本菌株におけるテレオシジン生合成遺伝子群は,NRPSをコードするtcnA,IL-Vへのモノテルペン側鎖導入酵素をコードするtcnD,機能未同定のMbtHをコードするtcnB,さらにcytochrome P450 oxidaseをコードするtcnCからなることを明らかにした.本年度は,TcnB及びTcnCをHis-tag融合タンパク質として大腸菌で大量発現させた.TcnB及びTcnCは,それぞれ8.6及び44.7kDの可溶性タンパク質として調製できた.TenCは,ポルフィリン環に起因する極大吸収が410nm付近に認められ,P450であることが示唆された.そこでTenC及びTenBを用いて,ホウレンソウ由来ferredoxinやferredoxin reductaseなどのP450還元再生系タンパク存在下でN-methyl-L-valyl-L-tryptophanolのIL-Vへの閉環を試みたが,IL-Vの生成を確認できなかった.TcnCがホウレンソウ由来の還元再生系では活性化していない可能性があり,TcnC特異的な還元再生系が必要なのかも知れない.今後in vivoでの閉環反応の検出も視野に入れて,放線菌(Streptomyces lividans TK-24)での発現を試みる必要がある.

Representatives of this study are らは, 発がんプロモーター・テレオシジンの Basic Bone Style であるインドラIL-V (IL-V) is a type of Streptomyces that produces large amounts of IL-V. blastmyceticus NA34-17 strain) is used, IL-V is a 4-bit sterile body, N-methyl-L-valyl-L-tryptophanol is ,IL-V pre-synthetic enzyme enzyme (NRPS), IL-V pre-synthetic enzyme (NRPS), IL-V pre-synthetic enzyme Yesterday, the strain におけるテレオシジン was produced and synthesized されることがyuxiang されている. Vへのモノテルペン side lock introduces enzymeをコードするtcnD, the function is not determinedのMbtHをコードするtcnB,さらにcytochrome P450 oxidaseをコードするtcnCからなることを明らかにした.This yearは,TcnB andびTcnCをHis-tag fusion A large number of coliform coliforms are present in TcnB and TcnC, 8.6 and 44.7kD soluble coliformsク性として Modulation できた.TenC は, ポルフィリンに Cause するMaximum absorption が410nm pay close められ, P450 であることが出款された.そこでTenC and びTenBを用いて,ホウレンソウOrigin ferredoxinやferredoxin reductase などのP450 reduction regeneration system タンパク in the presence of N-methyl-L-valyl-L-tryptophanol のIL-V への closed loop をtest みたが,IL- Confirmation of V's generation. TcnC's origin is the activation of the regeneration system.ていない Possibility があり, TcnC specific なrestoration and regeneration system がnecessary なのかも知れない.In the future vivoでのclosed-loop reaction の検出も入れて, actinomycetes (Streptomyces lividans TK-24) is now necessary and necessary.