発癌プロモーターとプロテインキナーゼCとの結合様式の有機化学的解析

致癌启动子与蛋白激酶C结合模式的有机化学分析

• 批准号: 07229226
• 负责人: 入江 一浩
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07229226/
• 关键词: 発癌プロモーター; プロテインキナーゼC; 光アフィニティーラベリング; ホルボールエステル; ジアゾアセチル基

プロテインキナーゼC(PKC)は、細胞内情報伝達におけるキ-エンザイムであると同時に、強力な発癌プロモーター・ホルボールエステルの主要なターゲットとしても注目されている。ホルボールエステルはリン脂質存在下、PKCの調節領域に結合することが知られている。また最近、リン脂質非存在下におけるPKC調節領域の一部と水溶性ホルボールエステルとの複合体の結晶構造も報告された。しかしながら、リン脂質存在下におけるホルボールエステルとPKC複合体の三次元構造は依然として不明な点が多い。本研究はこの点を明らかにするため、新しいタイプの光反応性ホルボールエステルを複数合成し、PKCモデルペプチドに対する光アフィニティーラベリングを行った。昨年、両親媒体ホルボールエステルの疎水性領域である12位、13位とともに、親水性領域である3位にジアゾアセチル基を有する新しい光反応性プローブ3種(1‐3)およびラット脳PKCγの101から151番目のアミノ酸からなるモデルペプチド(γ‐Cys2)を合成した。今年度はまずγ‐Cys2に対するプローブの結合能を測定したところ、3はphorbol 12,13‐dibutyrateの約1/100、1および2はともに約1/10という比較的高い結合能を示した。そこで、プローブをトリチウム標識し、γ‐Cys2に対する光アフィニティーラベリングを行った。その結果、12位あるいは13位にジアゾアセチル基を導入した1および2が、γ-Cys2を特異的に光標識できることが明らかになった。それに対して、3位に光反応性基を有する3を用いた実験では、γ-Cys2よりもホスファチジルセリンに対する標識がはるかに優先した。プローブ1および2によって標識されたγ-Cys2のアミノ酸残基の同定が今後の課題である。

プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ C (PKC) は, intracellular intelligence 伝 に お け る キ - エ ン ザ イ ム で あ る と に at the same time, strong な 発 carcinoma プ ロ モ ー タ ー · ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル の main な タ ー ゲ ッ ト と し て も attention さ れ て い る. ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル は リ ン, PKC in the presence of lipid に の adjust field combining す る こ と が know ら れ て い る. ま た recently, リ ン lipid under non existence に お け る の PKC adjust field a と water-soluble ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル と の complex の crystal structure も report さ れ た. し か し な が ら, リ ン に in the presence of lipid お け る ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル と PKC complex three dimensional structure は の still と し て unknown な が い more. This study は こ の point を Ming ら か に す る た め, new し い タ イ プ の light anti 応 sex ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル を plural synthetic し, PKC モ デ ル ペ プ チ ド に す seaborne る light ア フ ィ ニ テ ィ ー ラ ベ リ ン グ を line っ た. Last year, that struck close media ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル の 疎 water areas で あ る 12, 13 と と も に, hydrophilic で あ る three に ジ ア ゾ ア セ チ ル を has an す る new し い light anti 応 sex プ ロ ー ブ three ‐ 3 (1) お よ び ラ ッ ト 脳 PKC gamma の 101 か ら 151's mesh の ア ミ ノ acid か ら な る モ デ ル ペ プ チ ド (gamma ‐ C ys2)を synthesize た. Our は ま ず gamma ‐ Cys2 に す seaborne る プ ロ ー ブ の binding energy を determination し た と こ ろ, 3 は 12, 13 ‐ phorbol dibutyrate の about 1/100, 1 お よ び 2 は と も に about 1/10 と い う comparative high い binding energy を shown し た. そ こ で, プ ロ ー ブ を ト リ チ ウ ム identification し, gamma ‐ Cys2 に す seaborne る light ア フ ィ ニ テ ィ ー ラ ベ リ ン グ を line っ た. そ の results, 12 あ る い は 13 に ジ ア ゾ ア セ チ ル base を import し た 1 お よ び 2 が, gamma Cys2 を specific に light logo で き る こ と が Ming ら か に な っ た. そ れ に し seaborne て, three anti 応 に light base を have す る 3 を with い た be 験 で は, gamma Cys2 よ り も ホ ス フ ァ チ ジ ル セ リ ン に す seaborne る logo が は る か に priority し た. プ ロ ー ブ 1 お よ び 2 に よ っ て logo さ れ た gamma Cys2 の ア ミ ノ acid residues の with fixed が で の subject in the future あ る.

项目成果

入江一浩: "プロテインキナーゼCのホルボールエステル結合部位の光アフィニティーラベリングによる構造解析" 生化学. 68. 129-132 (1996)

Kazuhiro Irie：“通过光亲和标记对蛋白激酶 C 的佛波酯结合位点进行结构分析”《生物化学》68. 129-132 (1996)。