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臨床用遺伝子導入ベクター開発を目的としたコモンマーモセット前臨床動物系の確立

建立普通狨猴临床前动物系统以开发临床基因转移载体

基本信息

批准号：
12217027
负责人：
谷憲三朗
金额：
$ 54.14万
依托单位：
Kyushu University (2002-2004)The University of Tokyo (2000-2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1)GM-CSF免疫遺伝子治療(GVAX)を受けた患者血清を用いたSEREX法による腎癌腫瘍抗原の同定:GVAX接種後臨床経過が良好な患者培養腎癌細胞と腎癌細胞株よりcDNA発現λファージライブラリーを構築し、同症例の治療後血清を用いたSEREX法で計28陽性プラークを得た。塩基配列決定の結果、13種類の既知遺伝子のC末端側部分配列が抗原としてクローン化されたことがわかった(内訳はtNASPが9、EKI1が5、PHFが3、vezatin、E2bが2個、その他各1個)。癌細胞cDNAアレイ解析結果ではtNASP遺伝子で、甲状腺を除くほぼ全ての臓器で癌組織での発現が多い傾向が見られ、卵巣、子宮、頸部、精巣、小腸の5つの臓器で癌組織において有意な差が認められた。しかし、その他のSEREX抗原に関しては特にどちらか一方に片寄っている傾向はなかった。またこれらのSEREX抗原はRT-PCR法によりほぼ全ての正常臓器に発現を認めた。一方患者抗体パネルを用いたウェスタンブロット解析結果から、GVAXを受け、最も臨床的効果を認めた患者の治療後血清で抗tNASPならびにTMF抗体価が有意に上昇しており、特に後者は癌患者全般の血清中でも増加を認めるという大変興味深い結果を得た。今後さらに検体数を増して確認をして行くことが必要であるが、今後の癌診断・治療研究への応用が期待される。2)白血病モデルコモンマーモセット(CM)の作出:難治性の急性リンパ性白血病霊長類モデル作出を目的にp190タイプbcr/ablcDNA発現HIVベクターを作製し、CM自家末梢血幹細胞への遺伝子導入を行い、2頭のCMに自家移植し現在経過観察中である。同様にあと3頭への移植も行う予定である。白血病化の有無の観察およびLAM-CR法などでの経過観察を行う予定である。さらに成人T細胞性白血病モデル作出の準備も行っている。

1) Identification of renal cell carcinoma antigen by SEREX method in serum of patients receiving GVAX: Good clinical results after GVAX inoculation. cDNA generation of cultured renal cell carcinoma cells and renal cell carcinoma cell lines. As a result of base alignment determination, the C-terminal side alignment of 13 types of known genes was determined by antigen and protein (9 in tNASP, 5 in EKI, 3 in PHF, 2 in vezatin, 1 in E2b, and 1 in others). The results of cDNA analysis of cancer cells showed that there was a tendency to increase the occurrence of cancer tissue in all organs except tNASP gene, thyroid gland, uterus, neck, semen and small intestine. The SEREX antigen has a tendency to change. The SEREX antigen was detected by RT-PCR in all normal tissues. The results of the analysis showed that anti-tNASP antibodies in the serum of patients after treatment increased intentionally, especially in the serum of cancer patients. In the future, the number of patients will increase, and confirmation will be made. In the future, cancer diagnosis and treatment research will be expected. 2)The development of leukemia cell culture (CM): refractory acute leukemia cell culture for the purpose of p190-protein bcr/abl cDNA development HIV cell culture, CM autologous peripheral blood stem cell gene introduction, 2 CM autologous transplantation, and now under observation. The same is true of the three heads and the transplant. The LAM-CR method is used to determine whether leukemia is present or not. Adult T-cell leukemia patients are now preparing for the next phase of treatment.