使用 GFP 荧光成像细胞内磷酸化-猫眼课题宝

使用 GFP 荧光成像细胞内磷酸化

批准号：

10877019

负责人：

萩原正敏

金额：

$1.28万

依托单位：

Tokyo Medical and Dental University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Exploratory Research

财政年份：

1998

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1998 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877019/

关键词：

CAMP GFP CREB KID

项目摘要

项目成果

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申請者は細胞外からのシグナルがcAMPやカルシウムの上昇を介して、核内の遺伝子発現を制御するシグナルカスケードについて研究を行ってきた。転写因子CREBはA-kinaseによって活性化されるが、最近他のシグナルカスケード(CaM kinasesやMAP kinases)でも活性化され得る可能性が見出されている。そこで、本研究では、互いに異なる蛍光スペクトルを有する2種の緑色蛍光蛋白質Green Fluorescent Protein (以下GFPと略す)とCREBリン酸化ドメイン(以下KIDと略す)を繋いだキメラ蛋白を作り、KIDのリン酸化を蛍光スペクトルの変化としてモニターすることにより、細胞内での転写因子CREB活性化をリアルタイムでかつ定量的に観察することを試みた。このキメラ蛋白cDNAを組み込んだpQEベクターを導入した大腸菌から精製したキメラ蛋白が、CREBと同程度にA-kinaseなどでリン酸化をされることをin vitroで確かた。リン酸化の前後での蛍光変化を蛍光スペクトロメーターで調べたところ、リン酸化による蛍光変化が認められた。今後このキメラ蛋白が細胞内でのA-kinase活性のモニターに使えるか否か検討していく。

期刊论文(6)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

Kuroyanagi Noriyo,Onogi Hiroshi,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Novel SR-protein-specific kinase,SRPK2,disassembles nuclear speckles." Biochem.Biophys.Res.Commun.242,. 357-364 (1998)

Kuroyanagi Noriyo、Onogi Hiroshi、Wakabayashi Takashi、Hagiwara M.：“新型 SR 蛋白特异性激酶 SRPK2，可分解核斑点。”

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Shimomura Atsushi,Okamoto Yoshichika,Hirata Yoko,Kobayashi Makoto,Kawakami Kiyoshi,Kiuchi Kazutoshi,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Dominant Negative ATF1 Blocks Cyclic AMP-Induced Neurite Outgrowth in PC12D Cells." J.Neurochem.70,. 1029-1034 (1998)

Shimomura Atsushi、Okamoto Yoshichika、Hirata Yoko、Kobayashi Makoto、Kawakami Kiyoshi、Kiuchi Kazutoshi、Wakabayashi Takashi、Hagiwara M.：“显性负 ATF1 阻止 PC12D 细胞中环状 AMP 诱导的神经突生长。”

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Yoshida Kazuhilo,Imaki Junko,Okamoto Yoshichika,Iwakabe Hideki,Fujisawa Hitoshi,Matsuda Akira,Nakanisi Shigetada,Matsuda Hidehiko,and Hagiwara M.: "CREB-induced transcriptional activation depends on mGluR6 in rod bipolar cells." Mol.Brain Res.57,. 241-247

Yoshida Kazuhilo、Imaki Junko、Okamoto Yoshichika、Iwakabe Hideki、Fujisawa Hitoshi、Matsuda Akira、Nakanisi Shigetada、Matsuda Hidehiko 和 Hagiwara M.：“CREB 诱导的转录激活取决于视杆双极细胞中的 mGluR6。”

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Muro Yoshinao,Ogawa Yasushi,Kato Yoshihiro,Hagiwara M.: "Autoantibody to thioredoxin reductase in an ovarian cancer patient." Biochem.Biophys.Res.Commun.242,. 267-271 (1998)

Muro Yoshinao、Okawa Yasushi、Kato Yoshihiro、Hagiwara M.：“卵巢癌患者体内的硫氧还蛋白还原酶自身抗体。”

DOI： --

发表时间：

期刊：