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セミ・インタクト細胞を利用した情報伝達分子システムの再構成と1分子反応解析

セミ・インタクト細胞を利用した情報伝達分子システムの再構成と1分子反応解析
利用半完整细胞重建信息传递分子系统和单分子反应分析
批准号：
15013234
负责人：
佐甲 靖志
金额：
$2.88万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2003 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15013234/
关键词：
streptolysinO1分子計測上皮成長因子RasMAP kinaseMEKERK

项目摘要

项目成果

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細胞増殖信号を処理する細胞内分子システムEGF-Ras-MAPKシステムは、細胞増殖信号を処理する細胞内分子システムである。このシステムの内、新規遺伝子発現に至るメインストリーム、すなわちEGFと受容体の結合から、低分子量G蛋白質Rasの活性化、MAPキナーゼカスケードの情報伝達をへてERKが核移行するまでを再構成することを目的とし研究を行った。1)セミ・インタクト細胞システムの最適化StreptolysinO処理により調製したセミ・インタクト細胞内でEGFによるEGF受容体のリン酸化を指標として、情報伝達反応が、非処理細胞と同様に起こるような処理法の最適化をおこなった。セミ・インタクト細胞内に外来タンパク質が効率よく導入されることを確認した。2)タイパク質発現系、標識法の確立再構成系の要素となる各種情報伝達蛋白質を蛍光標識、精製するための発現系の構築を行った。EGF-Ras-MAPKシステムの構成要素であるMEK,ERKの蛍光蛋白質融合体の作製と培養細胞における発現の確認を行おこない、両蛍光蛋白質融合体が正常な局在と分子間相互作用を示すことが確認できた。CFP-MEK1とYFP-ERK2を共発現したHeLa細胞にEGF信号が入ると、細胞質に局在していたERKが核へ局在変化する。単独発現系ではMEKは細胞質、ERKは核内に発現し、共発現系(無刺激時)では、両蛋白質とも細胞質に局在した。これは、静止時の細胞ではERKとMEKが複合体を形成して、ERKの核移行が抑えられていることによる。セミ・インタクト系の実験でタンパク質濃度を制御するために、MEK,ERKの大腸菌発現系を構築し、MEK,YFP-ERKの精製法を確立した。
期刊论文(10)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Sako, Y., et al.: "Single-molecule visualization of cell signaling processes of epidermal growth factor receptor."J.Pharmacol.Sci.. 93. 253-258 (2003)
Sako, Y. 等人：“表皮生长因子受体的细胞信号传导过程的单分子可视化。”J.Pharmacol.Sci.. 93. 253-258 (2003)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Hibino, K., et al.: "Single- and multiple-molecule dynamics of the signaling from H-Ras to c-Raf1 visualized on the plasma membrane of living cells."Chem.Phys.Chem.. 4. 748-753 (2003)
Hibino, K. 等人：“在活细胞质膜上可视化从 H-Ras 到 c-Raf1 信号传导的单分子和多分子动力学。”Chem.Phys.Chem.. 4. 748-753
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
佐甲靖志: "細胞内情報処理過程の1分子観察"生理学会誌. 65. 277-282 (2003)
Yasushi Sakō：“细胞内信息处理的单分子观察”日本生理学会杂志 65. 277-282 (2003)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Sako, Y., Yanagida, T.: "Single-molecule visualization in cell biology."Nature Rev.Mol.Cell Biol.. 4. SS1-SS5 (2003)
Sako, Y., Yanagida, T.：“细胞生物学中的单分子可视化。”Nature Rev.Mol.Cell Biol.. 4. SS1-SS5 (2003)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
１分子動態に基づく細胞膜受容体の機能予測
Comprehensive approach toward understanding cell surface receptor functions coupled with membrane structure and lipid composition
膜構造・膜脂質ダイナミクスと共起する細胞膜受容体の情報伝達
細胞内情報伝達の再構成系における非線形反応の解析
海外基金