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上皮成長因子の情報伝達網の細胞内1分子可視化解析

上皮成長因子の情報伝達網の細胞内1分子可視化解析
表皮生长因子信息转导网络的细胞内单分子可视化分析
批准号：
12215086
负责人：
佐甲 靖志
金额：
$3.01万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2000 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215086/
关键词：
EGFEGF受容体GFPGrb2RasRaf1SH_2ドメインリン酸化

项目摘要

项目成果

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本研究は、上皮成長因子(EGF)により活性化される細胞増殖のための細胞内情報伝達網の働きを、細胞内で1分子計測し、解析することにより、増殖信号の伝達機構を解明することを目的とする。細胞における1分子測定は、これまでに報告がなかった。最近、我々は細胞の細胞表面でEGF分子の1分子可視化に成功し、EGF受容体の局在と運動、さらに分子間相互作用を細胞内で1分子測定することが可能になった。これらの1分子測定法をさらに発展させることにより、研究を進めている。本年度はEGFの情報伝達素過程の細胞内1分子追跡法の開発をおこなった。その結果、EGFの活性化を認識する抗体や、各種緑色蛍光蛋白質(GFP)との融合蛋白質などを用いて、以下の情報伝達素過程を細胞内で1分子追跡することができるようになった。(1)EGF受容体の自己リン酸化反応の1分子可視化自己リン酸化により構造変化したEGF受容体を特異的に認識する抗体を蛍光標識し、EGF受容体に結合した蛍光EGFと2色同時観察することによる。(2)EGF受容体とアダプター蛋白質の相互作用の1分子可視化EGF受容体を認識するアダプターGrb2タンパク質のSH2ドメインを大腸菌で発現・精製し蛍光標識した。(3)Ras,Raf-1の細胞内1分子可視化GFP変異体のひとつYFPとの融合タンパク質として細胞内に発現させたRas,Raf1を生きている細胞内で1分子可視化し、その運動を追跡することができるようになった。
期刊论文(3)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Y.Sako,K.Hibino,T.Miyauchi,Y.Miyamoto,M.Ueda & T.Yanagida: "Single-Molecule lmaging of Signaling Molecules in Living Cells"Single Molecules. 1. 159-163 (2000)
Y.Sako、K.Hibino、T.宫内、Y.Miyamoto、M.Ueda
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
F.Kano,Y.Sako,M.Tagaya,T.Yanagida.& M.Murata: "Reconstitution of brefeldin A-induced Golgi-tubulation and its fusion with the ER in semi-intact CHO cells"Mol.Biol.Cell.. 11. 3073-3087 (2000)
F.卡诺，Y.Sako，M.田谷，T.柳田。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Y.Sako,S.Minoguchi & T.Yanagida: "Single-molecule imaging of EGFR signalling on the surface of living cells"Nature Cell Biology. 2. 168-172 (2000)
萨科·美野口
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
１分子動態に基づく細胞膜受容体の機能予測
Comprehensive approach toward understanding cell surface receptor functions coupled with membrane structure and lipid composition
膜構造・膜脂質ダイナミクスと共起する細胞膜受容体の情報伝達
細胞内情報伝達の再構成系における非線形反応の解析
海外基金