分離核系を用いた真核細胞の転写ー修復および複製修復共役反応の解析

使用分离的核系统分析真核细胞中的偶联转录修复和复制修复反应

• 批准号: 10878119
• 负责人: 花岡 文雄
• 金额: --
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878119/
• 关键词: 転写; 修復; 複製; 分離核系; 紫外線; 色素性乾皮症; コケイン症候群; RNAポリメラーゼ

研究代表者および研究分担者は、真核細胞における転写と修復、および複製と修復の各共役反応の分離核系の構築とその解析を目指して、以下に述べる研究を行った。1) 培養細胞に紫外線を照射後、細胞から核を単離し、RNAポリメラーゼI(アクチノマイシンD感受性)及びII(αアマニチン感受性)によるRNA合成を、[α-^<32>P]UTPの取り込みによりそれぞれ測定する系を確立した。2) 1)で述べた分離核系をHeLa細胞、XP-C群細胞、CS-B群細胞に適用し、RNA合成に対する紫外線照射の影響を調べた。その結果、RNAポリメラーゼIによるRNA合成は、CS-B群細胞核では、HeLa細胞及びXP-C群細胞核に比べ、紫外線照射により強く阻害された。またRNAポリメラーゼIIによるRNA合成は、HeLa細胞及びXP-C群細胞核では紫外線による影響はほとんど見られなかったが、CS-B群細胞核では、紫外線照射によりRNAポリメラーゼIによるRNA合成よりもさらに著しい阻害が見られた。3) 複製と修復の共役反応については、SV40ウイルスのオリジンを有するプラスミドにリーディング鎖側あるいはラギング鎖側にそれぞれ1カ所損傷を持たせたものを鋳型として、複製と修復を共役させる試みを始めた。HeLa細胞抽出液を用いた無細胞系においては、損傷が乗り越えられること、一方、XP-V群細胞からの細胞抽出液では、少なくともピリミジンダイマーを有する鋳型では、それを乗り越えることが出来ないことを認めた。

Research representatives お よ び study share は, eukaryotic cells に お け る planning write と repair, お よ び copy と repair の against the total service 応 の separation nucleus is の build と そ の parsing を refers し て, the following に above べ る を line っ た. After 1) cultured cells に を exposure to the sun's ultraviolet rays, cell か ら nuclear を 単 from し, RNA ポ リ メ ラ ー ゼ I (ア ク チ ノ マ イ シ ン D sensitivity) and び II (alpha ア マ ニ チ ン susceptibility) に よ る を RNA synthesis, [alpha ^ < > 32 P] UTP の take り 込 み に よ り そ れ ぞ れ determination す を る department establish し た. 2) 1)で states that べた isolation of nuclear lineage をHeLa cells, XP-C group cells, and CS-B group cells に is applicable to する, RNA synthesis に is affected by する ultraviolet radiation <s:1> and を is adjusted べた. そ の results, RNA ポ リ メ ラ ー ゼ I に よ る は RNA synthesis, the CS - B group nucleus で は, HeLa and び XP - C group of nucleus に than べ, ultraviolet irradiation に よ り く strong resistance against さ れ た. ま た RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II に よ る RNA synthesis は, HeLa and び XP - C group of nucleus で は ultraviolet に よ る influence は ほ と ん ど see ら れ な か っ た が, CS - B group of nucleus で は, ultraviolet irradiation に よ り RNA ポ リ メ ラ ー ゼ I に よ る RNA synthesis よ り も さ ら に the し い resistance against が see ら れ た. 3) copy と repair の battle against 応 に つ い て は, SV40 ウ イ ル ス の オ リ ジ ン を have す る プ ラ ス ミ ド に リ ー デ ィ ン グ lock side あ る い は ラ ギ ン グ lock side に そ れ ぞ れ を hold 1 カ injury た せ た も の を type where と し て, copy と repair を "さ せ る try み を beginning め た. No cell line HeLa extract を with い た に お い て は, injury が 乗 り more え ら れ る こ と, one group of cells, XP - V か ら の cell extract で は, less な く と も ピ リ ミ ジ ン ダ イ マ ー を have す る type where で は, そ れ を 乗 り more え る こ と が out な い こ と を recognize め た.

项目成果

Kai,M.: "A new Drosophila ultraviolet light-damaged DNA recognition endonuclease that selectively nicks a(6-4)photoproduct site." Biochin.Biophys.Acta. 1397. 180-188 (1998)

Kai,M.：“一种新的果蝇紫外线损伤 DNA 识别核酸内切酶，可选择性地切割 (6-4) 光产物位点。”