ヒト悪性腫瘍細胞の産生する高カルシウム血症惹起因子に対するモノクロナル抗体の作製

针对人恶性肿瘤细胞产生的高钙血症诱导因子的单克隆抗体的生产

基本信息

批准号：
61570563
负责人：
佐藤幹二
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1987
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、高カルシウム血症惹起性のヒト扁平上皮癌細胞の産生する骨吸収促進因子を、培養上清よりSephadex G-100にて分画し、その骨吸収促進因子が分子量1.5万〜2万の蛋白であり、PTH様活性は有していないことを報告した。(論文(1))。また、この骨吸収促進因子はDEAE-Sepharoseカラムより、二峰性に溶出された。ところで最近interleukin1(IL-1)には骨吸収活性もあることが判明しているので、念のため各溶出分画のIL-1活性を測定してみたところ、ゲル濾過でもイオン交換クロマトでも、骨吸収活性とIL-1活性は全く同じ分画に溶出された。また骨吸収活性もIL-1活性も、同じ等電点(PI〜50)であった。さらに骨吸収活性もIL-1活性も抗IL-1α(poly-clonal)抗体により完全に失活したが、抗IL-1β(polyclonal)抗体では全く失活しないので、この扁平上皮癌(T3M-1)の産生する骨吸収促進因子はIL-1α様因子であることが明らかになった(論文(2))。なおIL-1αが骨吸収活性を有していることは、recombinant humaninterleuk in 1αを用いて証明されている(論文(3))。現在IL-1αをマウスに投与した場合、実際に高カルシウム血症が生ずるか否か検討中であるが、IL-1の作用機〓としては、骨芽細胞を介して作用しているらしいことが判明している(論文(4))。現在、このIL-1α様因子が遺伝子工学的にもIL-1αであることをNortlern blot hybri dizationにて確認中である。以上のごとく、この扁平上皮癌細胞はIL-1α様因子を産生ししいることが明きらかになったため、モノクロナル抗体の作製は中止したが、我々は最近さらに、PTH様因子を産生する扁平上皮癌を樹立しており、向後はこのPTH様因子に対するモノクローナル抗体を作製する予定である。

我们报道说，高钙血症诱导的人类鳞状细胞癌细胞产生的骨吸吸收启动子是用培养基上清液中的Sephadex G-100分级分离的，并且骨吸收启动子是一种蛋白质的蛋白质，其分子量为15,000至20,000，并且它没有PTH类似PTH的活性。（纸（1））。此外，该骨吸收启动子是通过DEAE-Sepharose柱双峰洗脱的。顺便说一句，最近已经发现，白介素1（IL-1）也具有骨吸收活性，因此，为了安全，我们测量了每个洗脱部分的IL-1活性，发现骨吸收活性和IL-1活性在完全相同的分数中洗脱，无论是凝胶过滤还是离子交易液或离子交换层。骨吸收和IL-1活性也具有相同的等电点（PI-50）。此外，抗IL-1α（多旋值）抗体完全灭活了骨吸收和IL-1活性，而不是通过抗IL-1β（多克隆）抗体抗体，因此揭示了由鳞状细胞癌（T3M-1）产生的骨吸收促进剂（T3M-1）是IL-1α样子（2）。此外，已经证明，IL-1α使用1α中的重组人列列克（Paper（3））具有骨吸收活性。目前，我们正在研究当对小鼠施用IL-1α时是否真的发生高钙血症，但是已经发现IL-1的机制通过成骨细胞起作用（论文（4））。当前，北方印迹杂交已被证实是IL-1α样因子基因设计的。如上所述，已经揭示了鳞状细胞癌细胞产生IL-1α样因子，因此已经停止产生单克隆抗体的产生，但是我们最近建立了鳞状细胞癌，从而产生了PTH样因子，我们计划生产违反这种PTH的因子而产生单克隆抗体。