ヌクレオソームポジショニングと転写調節機構

核小体定位和转录调控机制

• 批准号: 05780510
• 负责人: 清水 光弘
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780510/
• 关键词: 転写制御; クロマチン; ヌクレオソーム; RME1蛋白質; 亜鉛フィンガー; 減数分裂; S.cerevisiae

減数分裂は全ての真核生物に共通した生命現象であり、細胞分化を理解するうえで重要な過程である。酵母Saccharomyces cerevisiaeの減数分裂と胞子形成は、遺伝子群のカスケードと環境因子によって制御されている。IME1(Inducer of meiosis)遺伝子産物は、S.cerevisiae二倍体が減数分裂を開始するときに、特異的に発現する正の転写因子である。このIME1遺伝子の転写は、3つの亜鉛フィンガーを持つRME1(Repressor of meiosis)蛋白質によって抑制され、その結果として減数分裂開始が阻害される。しかし、この転写調節機構は分子レベルではほとんど分かっていない。本研究では、RME1蛋白質によるIME1遺伝子の転写抑制機構を明らかにすることを目的とし、酵母ゲノム中でクロマチン構造をとっているIME1遺伝子上流におけるRME1蛋白質の結合部位を解析した。まず、GAL1プロモーターにRME1をつないで誘導発現できるstrainsを作成した。次に、これらのintactな酵母細胞を用いて、UV-photo(254nm)またはジメチル硫酸によるフットプリントを多サイクルプライマー伸長法で解析した。その結果、RME1蛋白質は、IME1遺伝子上流-2037〜-2028にあるCCTCAAGAAGと-1955〜-1947にあるCCTCAAAAGの2つの部位に独立に結合することが明らかになった。さらに、結合部位に点変異を導入してDNA-蛋白質相互作用を解析し、既にX線解析で明らかにされたCys_2-His_2タイプの亜鉛フィンガーの結合様式と比較、検討した(投稿論文準備中)。現在、RME1結合部位近傍のヌクレオソームのポジションを解析しており、転写調節機構におけるクロマチン構造の役割を調べている。

Meiosis is an important process for understanding life phenomena common to all eukaryotes and cell differentiation. Meiosis and spore formation in Saccharomyces cerevisiae are controlled by environmental factors. IME1(Inducer of meiosis) gene product is a positive transcription factor for S. cerevisae diploid meiosis initiation and specific meiosis development. The RME1(Repressor of meiosis) protein is inhibited by the inhibition of meiosis initiation. The adjustment mechanism is composed of two parts: one part and the other part. In this study, we analyzed the binding sites of RME1 protein in yeast and yeast. GAL1 is the first to create strains that can be induced. Next, the yeast cells were analyzed by UV-photo(254nm) and multi-media elongation method. Results: RME1 protein, IME1 protein upstream-2037 ~-2028 In addition, changes in the binding site will be introduced to analyze DNA-protein interactions. X-ray analysis will reveal the binding patterns, comparisons, and discussions of the Cys_2-His_2 receptor (in preparation for submission). At present, RME1 binding site near the analysis of the complex solution, write the regulatory mechanism of the complex structure of the complex solution to adjust.