クロマチンの構造変化による転写制御機構の解明

通过染色质结构变化阐明转录控制机制

• 批准号: 06780565
• 负责人: 清水 光弘
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780565/
• 关键词: 転写制御; クロマチン; ヌクレオソーム; Rmel蛋白質; Zn-finger; S.Cerevisiae; non-B型DNA構造

1.酵母ゲノム及びミニ染色体におけるZn-finger蛋白質Rmelによる転写抑制機構Zn-fingerを持つRmel(Repressor of Meiosis)は,S.cerevisiaeの減数分裂活性化因子であるIME1(Inducer of Meiosis)の転写を抑制することによって減数分裂開始を阻害している.Rmelによる転写抑制機構を明らかにするために,UV-photo,dimethyl sulfate(DMS)in vivo footprint法,Northern法などによってIME1,RME1の変異株を解析した結果,以下のことが明らかになった.1) RmelはIME1上流-2030と-1950の2箇所に結合し,2つの部位の塩基配列には,コンセンサス(CCTCAA(G)AAG)がある.2)RmelのZn-fingerがin vivoでDNA結合に関与しており,転写抑制の機能に必須である.3)2つの結合部位を破壊すると,RmelはIME1の転写を抑制できなくなり,Rmel欠損株と同じように胞子形成が起こる.4)RGR1とSIN4の遺伝子を破壊しても,Rmelの結合には変化はないが,転写のderepressionが起こる.5)CYC1プロモーターにおけるRmelの転写抑制機構として,転写活性化因子Hap1,Hap2/3/4の結合が阻害されることがin vivoで実証された.以上の知見から,Rmelの転写抑制機構におけるクロマチン構造の関与が示唆された.2.DNAの高次構造とクロマチンの構築酵母α2 repressorによってポジショニングしたヌクレオソームの中央またはリンカー部位に分子内三重鎖,cruciform,左巻Z-DNAの配列をクローンした.このようなnon-B型DNA構造がヌクレオソームを破壊して,ヌクレアーゼ感受性領域を形成することが示唆された.

1. Yeast DNA and chromosome DNA Zn-finger protein Rmel DNA Zn-finger protein Rmel DNA inhibitor Rmel (Repressor of Meiosis),S.cerevisiae ́ meiotic activation factor IME1 (Inducer of Meiosis) inhibition of meiosis initiation,UV-photo,dimethyl sulfate(DMS)in vivo footprint,Northern method, IME1, RME1 is the result of the analysis of different plants, and the following are the results. 1) Rmel IME1 upstream-2030-1950 2 combinations, 2 combinations of different parts of the base, and the following are the results.(CCTCAA(G)AAG) Rmel's binding inhibition mechanism was established in vivo by the binding inhibition mechanism of Rmel's activation factor Hap1, Hap2/3/4. 2. DNA higher-order structure and structure of yeast α 2 repressor. 2. DNA higher-order structure and structure of yeast α2 repressor. 3. DNA higher-order structure and structure of yeast α2 repressor. 4. DNA higher-order structure and structure of yeast α2 repressor. This non-B-type DNA construct is very sensitive to the formation of sensitive domains.