クロマチンの構造変化による転写制御機構の解明

通过染色质结构变化阐明转录控制机制

• 批准号: 06780565
• 负责人: 清水 光弘
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780565/
• 关键词: 転写制御; クロマチン; ヌクレオソーム; Rmel蛋白質; Zn-finger; S.Cerevisiae; non-B型DNA構造

1.酵母ゲノム及びミニ染色体におけるZn-finger蛋白質Rmelによる転写抑制機構Zn-fingerを持つRmel(Repressor of Meiosis)は,S.cerevisiaeの減数分裂活性化因子であるIME1(Inducer of Meiosis)の転写を抑制することによって減数分裂開始を阻害している.Rmelによる転写抑制機構を明らかにするために,UV-photo,dimethyl sulfate(DMS)in vivo footprint法,Northern法などによってIME1,RME1の変異株を解析した結果,以下のことが明らかになった.1) RmelはIME1上流-2030と-1950の2箇所に結合し,2つの部位の塩基配列には,コンセンサス(CCTCAA(G)AAG)がある.2)RmelのZn-fingerがin vivoでDNA結合に関与しており,転写抑制の機能に必須である.3)2つの結合部位を破壊すると,RmelはIME1の転写を抑制できなくなり,Rmel欠損株と同じように胞子形成が起こる.4)RGR1とSIN4の遺伝子を破壊しても,Rmelの結合には変化はないが,転写のderepressionが起こる.5)CYC1プロモーターにおけるRmelの転写抑制機構として,転写活性化因子Hap1,Hap2/3/4の結合が阻害されることがin vivoで実証された.以上の知見から,Rmelの転写抑制機構におけるクロマチン構造の関与が示唆された.2.DNAの高次構造とクロマチンの構築酵母α2 repressorによってポジショニングしたヌクレオソームの中央またはリンカー部位に分子内三重鎖,cruciform,左巻Z-DNAの配列をクローンした.このようなnon-B型DNA構造がヌクレオソームを破壊して,ヌクレアーゼ感受性領域を形成することが示唆された.

1。RMEL（减数分裂的阻遏物），该机构在酵母基因组中具有Zn手指蛋白RMEL的Zn手指机制，通过抑制IME1（诱导剂）的转录（塞雷维氏链球菌的减数分裂激活剂）来抑制减数分裂的起始。为了阐明RMEL的转录抑制机制，我们使用UV -Photo，二甲基硫酸二甲基硫酸二甲基（DMS）在体内足迹，北部和其他方法分析了IME1和RME1的突变体，并揭示了以下1）RMEL与IME 1 -2030和-2030和-2030和-1950的位置的rmel结合。 （CCTCAA（G）AAG）。 2）RMEL的Zn指涉及体内DNA结合，对于转录抑制的功能至关重要。 3）当两个结合位点被破坏时，RMEL无法抑制IME1的转录，并且孢子形成就像RMEL缺乏菌株一样。 4）即使RGR1和SIN4的基因被破坏，RMEL的结合也不会改变，而是会发生转录的抑制。 5）作为CYC1启动子中RMEL转录抑制的一种机制，转录激活剂HAP1和HAP2/3/4的结合被抑制。上述发现证明了这一点。以上发现表明，染色质结构参与RMEL的转录抑制机制。 2。将染色质的DNA高阶结构和构造的染色质结构和分子内三形，十字形和左包裹的Z-DNA的序列在酵母α2抑制剂位于核小体的中央或接头位点中克隆。有人提出这种非B型DNA结构破坏了核小体并形成了核酸酶敏感区域。