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B細胞初期分化におけるc-FosやBCL6遺伝子の機能解析

c-Fos和BCL6基因在早期B细胞分化中的功能分析

基本信息

批准号：
08670359
负责人：
徳久剛史
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はc-FosやBCL6遺伝子を発現誘導型にしたトランスジェニックマウスや、それらの遺伝子を欠損させたノックアウトマウスにおけるB細胞初期分化能を解析することにより、それらの遺伝子産物のB細胞初期分化における機能を明らかにすることを目的とした。発現誘導型のMx-c-fosマウス由来の骨髄細胞をPA6ストローマ細胞とIL-7を用いたInvitroの系で培養する系に、発現誘導剤を加えて外因性c-Fosの発現を誘導した時の幼若B細胞の細胞周期をFACSにより解析した。その結果、G2/M期での細胞周期の停止とともに、アポトーシスに陥るB細胞の増加が観察された。この幼若B細胞から粗RNAを抽出し、その中における細胞死を誘導するFasやBax、細胞死を阻害するBcl-2やBcl-XLの発現をRT-PCR法により解析した。その結果、これらのアポトーシス関連遺伝子の発現には著しい変化は見られなかった。しかし、幼若B細胞の分化過程で必須の遺伝子であるRag-1やRag-2の発現が過剰のc-Fosの発現誘導により、著しく抑制されていた。この結果から、過剰のc-Fosは幼若B細胞の細胞周期を停止させることによりアポトーシスを誘導することが示唆された。不活性型のマウスBCL6遺伝子をES細胞に導入して内因性のBCL6遺伝子と標的遺伝子組み換えをしたのちキメラマウスを作製し、最終的にノックアウトマウスを作製した。このマウスは、生後8週以内に心筋細胞の壊死をおこして死亡してしまう(投稿中)。そこで、BCL6の成熟B細胞からメモリーB細胞への分化過程における機能を調べる目的で、このKOマウス由来の骨髄細胞を放射線照射したrag-1 KOマウスに移植して骨髄キメラを作製した。このキメラマウスの胸腺や脾臓におけるリンパ球の表面抗原解析では異常が見られていなかったことから、BCL6はリンパ球の初期分化にはあまり関与していないと考えられた。

In this study, the induction of c-Fos and BCL6 gene expression was studied. The results showed that the expression of c-Fos and BCL 6 gene expression was induced by the induction of c-Fos and BCL 6 gene expression. FACS analysis of juvenile B cells induced by exogenous Mx-c-fos expression Invitro and Invitro by PA6 cells and IL-7 As a result, cell cycle arrest in the G2/M phase and the growth of B cells in the absence of such an event were observed. The expression of Bcl-2 and Bcl-XL in immature B cells was analyzed by RT-PCR. The results of the study show that there is no correlation between the occurrence of the disease and the occurrence of the disease. The differentiation process of immature B cells requires the induction and suppression of the development of Rag-1 and Rag-2 and the development of c-Fos. The result is that the c-Fos of the juvenile B cell cycle is arrested and induced. Inactive BCL-6 gene is introduced into ES cells, and the target gene of BCL-6 gene is introduced into ES cells. The death of cardiac muscle cells within 8 weeks of birth (submission). BCL-6 mature B cells are irradiated with radiation and transplanted into the bone marrow. The surface antigen analysis of BCL6 is abnormal.