分子シャペロンによるT細胞受容体の発現調節機構の解明

阐明分子伴侣对T细胞受体表达的调控机制

• 批准号: 10172229
• 负责人: 小安 重夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10172229/
• 关键词: T細胞; 温度感受性変異; SH2ドメイン; TCRζ; シグナル伝達

T細胞受容体(TCR)を介したシグナルには、TCRζサブユニットのリン酸化とそれに結合するチロシンキナーゼZAP70が重要な役割を果たす。ZAP70はCD8欠損症の責任遺伝子であるが、本年度我々はCD8欠損症の患者の解析をする機会があり、この患者のZAP70遺伝子がヒトの疾患では珍しい温度感受性変異を持つことを見いだした。2つのZAP70遺伝子座は共にミスセンス変異を持ち、その結果、低温では安定であるが、常温では合成直後に速やかに分解する。我々が見いだしたミスセンス変異は、1個所が2つのSH2ドメインの間のプロリンがグルタミンに置換された変異(P80Q)であり、もう1個所はキナーゼドメインの中のXIドメインと呼ばれる部位のメチオニンがロイシンに置換された変異(M572L)であった。温度感受性を決定する要因を解析するために、in vitro合成系を用いてタンパク質を合成した後にさまざまな温度でその安定性を検討した。M572L変異体の場合にはそのキナーゼ活性も測定した。すると、M572L変異体は30度Cにおいては比較的安定に合成されたが、その酵素活性が低下していた。一方P80Q変異体の場合はこの変異が2つのSH2ドメインの間にあることから、温度の違いによって、リン酸化されたζサブユニットへの結合活性に差が見られる可能性が考えられた。そこで、ζサブユニットの最も膜近傍のアミノ酸配列を持つ合成リン酸化ペプチドを用い、さまざまな温度における結合活性を測定した。その結果、P80Q変異体は一旦30度Cで合成された後は37度Cに温度を上昇しても結合能を失わないことが明らかになった。従って、P80Q変異体の場合には、タンパク合成の過程、特に折り畳み過程が温度感受性であると考えられた。現在、ZAP70の折畳みにかかわるシャペロン蛋白質の解析を進めている。

T cell receptor (TCR) mediates cell proliferation, and TCR receptor mediates cell proliferation. ZAP 70 is responsible for CD8 deficiency, and this year we have the opportunity to analyze patients with CD8 deficiency. 2. ZAP70 has a variety of properties, such as stability at low temperatures and decomposition at normal temperatures. I see that there is a difference between the two parts of the SH and the two parts of the SH. The difference between the two parts of the SH and the two parts of the SH. Temperature sensitivity is determined by the analysis of temperature stability in vitro synthesis systems. M572L is a non-standard instrument. M572L is a relatively stable synthetic enzyme with low activity at 30 ° C. There is a possibility that when a P80Q changes, there may be changes in the binding activity between the 2 and SH2 ðTM "media, changes in temperature, and changes in the binding activity of the acid. The binding activity of the acid in the vicinity of the membrane was determined by the reaction temperature and reaction time. As a result, P80Q is different from 30 ° C. After synthesis, the temperature rises to 37 ° C. The binding energy is lost. P80Q is different from the original process, especially the temperature sensitivity process. Now, ZAP70's protein analysis is progressing.

项目成果

Katamura,K.,et al.: "Existence of activated and memory CD4^+ T cells in peripheral blood and their skin infiltration in CD8 deficiency." Clin.Exp.Immunol.115. 124-130 (1999)

Katamura,K.,et al.：“外周血中存在活化和记忆 CD4^ T 细胞及其在 CD8 缺乏症中的皮肤浸润。”

Matsuda, S., et al.: "T lymphocyte activation signals for interleukin-2 production involves activation of MKK6-p38 and MKK7-SAPK signaling pathways sensitive to cyclosporin A." J.Biol.Chem.273. 12378-12382 (1998)

Matsuda, S. 等人：“产生白细胞介素 2 的 T 淋巴细胞激活信号涉及对环孢菌素 A 敏感的 MKK6-p38 和 MKK7-SAPK 信号通路的激活。”

Suzuki, H., et al.: "Positive selection of CD4^+ T cells by TCR-specific antibodies requires low valency crosslinkin: Implications for repertoire selection in the thymus." Eur.J.Immunol.28. 3252-3268 (1998)

Suzuki, H., et al.：“TCR 特异性抗体对 CD4^ T 细胞的阳性选择需要低价交联素：对胸腺中库选择的影响。”

Ivanov, I.B., et al.: "Adhesion energy of human T cells to adsorption layers of monoclonal antibodies measured by the film trapping technique." Biophys.J.75. 545-556 (1998)

Ivanov, I.B. 等人：“通过薄膜捕获技术测量人类 T 细胞对单克隆抗体吸附层的粘附能。”