tRNAアンチコドンを標的とするヌクレアーゼトキシンの研究

靶向tRNA反密码子的核酸酶毒素研究

• 批准号: 10174209
• 负责人: 正木 春彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174209/
• 关键词: トキシン; コリシン; E5; tRNA; リボヌクレアーゼ; インヒビター; アンチコドン; タンパク合成

蛋白合成を止めるトキシンの中で,コリシンE5は大腸菌細胞内の特定のtRNAを切断する全く新しいヌクレアーゼであることを明らかにした.この酵素活性はコリシンE5のC末端ドメインE5-CRD(115アミノ酸)にあり,ColE5プラスミドを持つ生産菌は,コリシン遺伝子の下流の免疫性遺伝子(immE5)がインヒビターImmE5を合成することにより自殺を免れる.今回E5-CRD/ImmE5複合体及び各蛋白を精製し,N末端配列を決定したところ,immE5は旧来の想定より26コドン上流から始まり,ImmE5は108アミノ酸からなることを見出した.さらにE5-CRDは,大腸菌可溶性画分S-30に対してin vitroの蛋白合成を停止させるが,ポリ(U)依存ポリPhe合成で見たリボソーム機能を損なわないことを確認し,細胞内標的がリボソームでなく,アンチコドン1文字目にGの修飾塩基キューイン(Q)をもつTyr,His,Asn,Aspに対する合計5種のtRNA分子であるという先の推定を裏付けた.また生育中の大腸菌に,順次2倍希釈のコリシンE5を作用させてRNA画分を抽出し,各tRNAの3'末端側配列に相補的な合成DNAをプローブとしてノザン解析を行うことによって,細胞毒性と細胞内でのtRNAの切断の程度を比較したところ,両者に強い相関が見られ,これらのtRNA分子がコリシンE5の真の一次標的であることが判明した.このような特定のtRNAの特定の部位を標的とするコリシンE5は,“cytotoxic tRNase"として新しいトキシンのカテゴリーを導入した.またE5-CRDは他の蛋白との相同性が見いだせず,またリボヌクレアーゼの触媒作用にとって不可欠と思われてきたHisを分子中に持たないので,酵素としても新しいカテゴリーを形成する.

Protein synthesis を check め る ト キ シ ン の で, コ リ シ ン E5 は の coliform cell specific の tRNA を cut す る く all new し い ヌ ク レ ア ー ゼ で あ る こ と を Ming ら か に し た. こ の enzyme activity は コ リ シ ン E5 の C terminal ド メ イ ン E5 - CRD (115 ア ミ ノ acid) に あ り, ColE5 プ ラ ス ミ ド を つ raw Traces of producing bacterium は, コ リ シ ン 伝 の obscene の immunity but 伝 son (immE5) が イ ン ヒ ビ タ ー immE5 を synthetic す る こ と に よ り suicide を れ free る. Today back to E5 - CRD/ImmE5 protein complexes and び を refined し, N terminal with column を decided し た と こ ろ, ImmE5 は old to の scenarios よ り 26 コ ド ン upper か ら beginning ま り, ImmE5 は 108 ア ミ ノ acid か ら な る こ と を shows し た. さ ら に E5 - CRD は, coliform soluble picture S - 30 に し seaborne て I n Vitro の protein synthesis を stop さ せ る が, ポ リ (U) dependent ポ リ Phe synthetic で see た リ ボ ソ ー を ム function loss な わ な い こ と を confirm し, intracellular targets が リ ボ ソ ー ム で な く, ア ン チ コ ド ン 1 text に G の salt group キ ュ ー イ ン (Q) を も つ Tyr, ihs, the Asn, Asp に す seaborne る total 5 Kind of の tRNA molecules で あ る と い う の first presumption in pay け を た. ま た fertility in の coliform に, progressive 2 times when 釈 の コ リ シ ン E5 を role さ せ て RNA を drew し draw points, and each tRNA の 3 'end cross-draw listed に phase な synthetic DNA を プ ロ ー ブ と し て ノ ザ ン parsing line を う こ と に よ っ て, cytotoxicity と intracellular で の TRNA の を well cut の し た と こ ろ, struck the strong に い phase masato が see ら れ, こ れ ら の tRNA molecules が コ リ シ ン E5 の is の a mark で あ る こ と が.at し た. こ の よ う な specific の tRNA の specific part の を mark と す る コ リ シ ン E5 は, "cytotoxic TRNase "と し て new し い ト キ シ ン の カ テ ゴ リ ー を import し た. ま た E5 - CRD は he の protein と の identity が see い だ せ ず, ま た リ ボ ヌ ク レ ア ー ゼ の catalysis に と っ て not owe と think わ れ て き た に in His を molecular た な い の で, enzyme と し て も new し い カ テ ゴ リ ー を form す る.

项目成果

T.Ogawa: "A Cytoloxic RNase Targeting Specific tRNA Anticodons" Science. (in press).

T.Okawa：“一种针对特定 tRNA 反密码子的细胞毒 RNase”科学。