Cytotoxic tRNase,コリシンDの研究
细胞毒性 tRNase 大肠菌素 D 的研究
基本信息
- 批准号:11876019
- 负责人:
- 金额:$ 1.41万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:1999
- 资助国家:日本
- 起止时间:1999 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
我々は,蛋白合成を阻害すると言われてきたコリシンDを大腸菌に作用させると,その菌体由来のRNA画分に低分子RNAが出現することを発見した.これを精製して配列決定すると,Argに対するmajorなtRNAがアンチコドンループで切断された5'側,および3'側断片であった.コリシンD処理大腸菌のRNA画分のアミノ酸受容活性を調べると,Argに対する活性のみが大きく損なわれていた.そこで,各種tRNAの3'側部分に相補的なDNAプローブを用意し,コリシンD処理菌のRNA画分をノザン解析すると,Argのmajor tRNAだけでなくminorなtRNAを含め計4種のアルギニンtRNAが特異的に切断されていた.さらに大腸菌の全tRNA画分に対してコリシンDを作用させ,同様にノザン解析すると,mojorなtRNA(ICGアンチコドン)とminorなtRNA(CCG)が切断されていた.さらにハイブリダイゼーションを利用してtRNA(ICG),tRNA(U*CU),tRNA(CCU)を精製し,コリシンDを作用させると,いずれもアンチコドンループ内の38/39位間が切断されており,コリシンDがin vivoでもin vitroでも4種のアルギニンtRNAを切断することを明らかにした.コリシンDのC末端付近の1箇所のHis変異で,殺菌活性とtRNA切断活性が同時に失われることを見出し,tRNA切断が殺菌活性の原因であることを明らかにした.これは我々がさきに見出したコリシンE5に続く第2のtRNAを標的とするトキシンである.しかし両者は分子レベルでの共通点が何もなく,進化と機能が興味深い.
I 々 は, protein synthesis を resistance against す る と said わ れ て き た コ リ シ ン D を coliform に role さ せ る と, そ の low draw points に origin の RNA molecules RNA が appear す る こ と を 発 see し た. こ れ を refined し て match column decided す る と, Arg に す seaborne る major な tRNA が ア ン チ コ ド ン ル ー プ で cut さ れ た 5 'side , お よ び 3 'side fragment で あ っ た. コ リ シ ン D 処 Richard coliform の RNA draw points の ア ミ ノ acid by volume activity を adjustment べ る と, Arg に す seaborne る active の み が big き く loss な わ れ て い た. そ こ で, various tRNA の 3' side part に phase of な DNA プ ロ ー ブ を intention し, コ リ シ ン D 処 Richard bacteria の RNA draw points を ノ ザ ン solution Analyze すると,Arg すると major TRNA だ け で な く minor な tRNA を containing め meter four の ア ル ギ ニ ン tRNA が specific に cut さ れ て い た. さ ら に coliform の tRNA draw points に し seaborne て コ リ シ ン D を effect さ せ, with others in に ノ ザ ン parsing す る と, mojor な tRNA (ICG ア ン チ コ ド ン) と minor な tRN A (CCG) が cut さ れ て い た. さ ら に ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を using し て tRNA (ICG), tRNA (U * CU), tRNA (CCU) を refined し コ リ シ ン D を effect さ せ る と, い ず れ も ア ン チ コ ド ン ル ー プ の within 38/39 of A が cut between さ れ て お り, コ リ シ ン D が I n vivoで で in Vitro で も four の ア ル ギ ニ ン tRNA を cut す る こ と を Ming ら か に し た. コ リ シ ン D の 1 C end paying nearly の is の ihs - で, bactericidal activity と tRNA to cut off the active が に loss at the same time わ れ る こ と を see し, tRNA cut が bactericidal activity の reason で あ る こ と を Ming ら か に し た. こ れ は I 々 が さ き に shows し た コ リ シ ン E5 に 続 く 2 の tRNA を mark と す る ト キ シ ン で あ る. し か し struck the は molecular レ ベ ル で の what in common が も な く, evolutionary が tumblers deep い と function.
项目成果
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专著数量(0)
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