tRNAアンチコドンを標的とするヌクレアーゼトキシンの研究

靶向tRNA反密码子的核酸酶毒素研究

• 批准号: 11155207
• 负责人: 正木 春彦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155207/
• 关键词: トキシン; コリシン; tRNA; 修飾塩基; リボヌクレアーゼ; RNase; インヒビター; 触媒

我々は,コリシンE5が大腸菌細胞内のtRNAを切断するユニークなRNaseであることを見出した.酵素活性はC末端ドメインCRDにあり,生産菌はインヒビターImmE5を合成して自殺を免れている.E5-CRDは生理的にはTyr,His,Asn,Aspに対するtRNA分子に特異的に働き,アンチコドン1/2文字目間を切断する.この4種のtRNAは共通してアンチコドン1文字目にGの修飾塩基であるキューイン(Q)をもつが,tRNAにこの修飾の入らないtgt変異大腸菌も野生型と同様にコリシンE5感受性で,また変異株由来の4種のtRNAも同様に切断するので,Qそのものが基質認識に必須ではないことが推定された.またE5-CRDの分子量は基質tRNAの約半分であるので,E5-CRDは基質の部分構造を認識していると考え,各種の合成RNAを用意し,試験管内で切断感受性を検討し,E5-CRDが本質的には局所的RNA塩基配列を認識するRNA制限酵素であると結論した.またE5-CRDは,切断されたRNAの末端に2',3'-環状リン酸と5'-OHを生じる点では普通のリボヌクレアーゼと類似の反応機構が想定されるにもかかわらず,既知ヌクレアーゼと配列相同性がまったくなく,また既知のヌクレアーゼで一般塩基触媒,あるいは一般酸塩基触媒として必須のHisをE5-CRDが1個も持っていない.現在,E5-CRDとdGdUの複合体のX線結晶構造解析を進めており,その予備的結果をもとにHisに代わる触媒残基を探し,Argを候補として見つけた.

I'm going to cut off the tRNA in E. coli cells. The enzyme activity is C-terminal CRD, and the production strain is capable of synthesizing ImmE5 and preventing suicide. E5-CRD is physiological Tyr,His,Asn,Asp, and tRNA molecule specific Tyr,His,Asn,Asp. These four tRNA species share the same gene base as the G gene base, and the Q gene base must be presumed to have the same gene base as the wild type and the same gene base as the E5 gene base. The molecular weight of E5-CRD is about half of that of substrate tRNA. Some structures of substrate tRNA are recognized by E5-CRD. RNA synthesis of various enzymes is studied. The sensitivity of enzyme to cleavage is investigated in vitro. RNA restriction is recognized by RNA base alignment of E5-CRD. E5-CRD is a common enzyme that cleaves RNA at the end of the 2',3'-cyclic acid and 5'-OH chain. It is a common enzyme that cleaves RNA at the end of the 2',3'-cyclic acid and 5'-OH chain. It is a common enzyme that cleaves RNA at the end of the 2',3'-cyclic acid and 5'-OH chain. Now, X-ray crystallographic analysis of E5-CRD and dGdU complexes has been carried out. The prepared results show that the catalytic residues of His derivatives have been detected, and Arg has been selected as candidates.