tRNAアンチコドンを標的とするヌクレアーゼトキシンの研究

靶向tRNA反密码子的核酸酶毒素研究

• 批准号: 09278208
• 负责人: 正木 春彦
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278208/
• 关键词: コリシン; リボヌクレアーゼ; tRNA; 修飾塩基; アンチコドン; インヒビター; キューイン(queuine); 大腸菌

蛋白合成を止めるトキシンの中で,rRNAを切断してリボソームを失活させるコリシンE3は有名であるが,コリシンE5はこの様なリボトキシンとは異なり,大腸菌細胞内の特定のtRNAを切断する全く新しいヌクレアーゼであることを明らかにした.この酵素活性はコリシンE5のC末端ドメインE5C(115アミノ酸)にあり,ColE5プラスミドを持つ生産菌は,コリシン遺伝子の下流の免疫性遺伝子がインヒビターImmE5(82アミノ酸)を合成することにより自殺を免れる.E5Cはin vitroで大腸菌全tRNAのうち,アンチコドン1文字目にGの修飾塩基キューイン(Q)をもつTyr,His,Asn,Aspに対する合計5種のtRNA分子に特異的に働き,アンチコドン付近,おそらくQの3′側のホスホジエステル結合を,5′OHの形で切断する.また生育中の大腸菌に致死量のコリシンE5を作用させ,RNA画分を抽出して,各tRNAの3′末端側配列に相補的な合成DNAをプローブとしてノザン解析を行うと,やはり上記tRNAが特異的に切断されていた.しかしQ修飾を欠く変異株でもコリシンE5に対して感受性であり,またE5処理したその株から抽出したRNAでも上記tRNAが切断されていたので,基質認識にQ自身は必須でないと考えられ,tRNAに対するCRDの分子認識に特別の興味が持たれる.また基質となるtRNAのアンチコドン/ステムを模した合成RNAをも切断するので,かなり局所的なtRNAの構造を認識しているものと思われる.

Protein synthesis in the middle of the protein synthesis,rRNA cut off, release of protein, inactivation of protein E3, reverse transcription, Escherichia coli cells specific tRNA cut off, completely new, reverse transcription, reverse transcription. This enzyme activity is related to the C-terminal end of E5, E5C (115 amino acid), ColE5 protein, and the production of E. coli. E5C protein is related to the synthesis of E. coli. Asp is a 5-mer molecule. In addition, when a lethal dose of CORISHEN E5 is applied to Escherichia coli during reproduction,RNA fractions are extracted, and the complementary synthetic DNA arranged on the 3′ terminal side of each tRNA is analyzed, but the tRNA is specifically cut off. E5 treatment is necessary to isolate the RNA from the plant and to isolate the tRNA from the CRD. The structure of the tRNA in the matrix is understood and thought about.

项目成果

Masaki,H.et al.: "Colicin E5 as a new type of cytotoxin,which cleaves a specific group of tRNAs." Nucl.Acids Symp.Ser.37. 287-288 (1997)

Masaki, H. 等人：“大肠杆菌素 E5 是一种新型细胞毒素，可裂解特定的 tRNA 组。”