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VEGFに結合するマトリックス成分とその分解による活性調節機構

与VEGF结合的基质成分及其降解活性调节机制

基本信息

批准号：
10877231
负责人：
岡田保典
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

軟骨組織は無血管性の特殊に分化した組織である。本研究では、本来血管のない関節軟骨組織において、強力な血管新生因子である血管内皮増殖因子(VEGF)の発現を検討するとともに、VEGFに結合することでその生理活性を調節する分子のクローニングを目指す。また、VEGFと未知の結合分子との複合体をマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)で分解することでVEGF活性の変化を調べる。得られた成果は以下の通りである。(1).慢性関節リウマチと変形性関節症の関節軟骨組織においてVEGF_<121>とVEGF_<165>のmRNA発現が認められ、in situ hybridizationで軟骨破壊の進んだ部位の軟骨細胞が標識された。また、VEGF受容体はKDRとflt-1は陰性であったが、neuropilin-1が検出された。軟骨組織器官培養上清中にVEGF蛋白が検出され、その産生は培養軟骨細胞でも確認された。免疫染色による軟骨細胞のVEGF染色陽性率は、Mankin scoreと有意な相関を示し(n=32,r=0.827,p<0.0001)、軟骨破壊の程度と関連が見られた。(2).VEGFに結合する分子をクローニングするために、VEGF_<165>をbaitとしてGAL4based yeast two hybrid systemにより軟骨細胞cDNAライブラリーをスクリーニングした。陽性を示した162クローンのうち128クローンを部分シークエンスしたところ、既知の分子としてフィブロネクチン、コラーゲン、テネシンなどの細胞外マトリックス分子の他、膜タンパクや種々のサイトカインなどが含まれていた。これらの分子とVEGF_<121>とVEGF_<165>との結合能をプレートアッセイとBlACOREを用いて検討中である。また、VBGF_<165>との複合体での血管内皮細胞の増殖活性、複合体のMMPでの分解と活性変化を検討予定である。

Cartilaginous tissue has no vascular differentiation. This study aims to investigate the molecular mechanisms involved in the regulation of vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in articular cartilage tissue and vascular endothelial growth factor (VEGF) binding. The complex of VEGF and unknown binding molecules regulates the decomposition of VEGF (MMP). The results of the study are as follows: (1). Expression of VEGF_mRNA in articular cartilage tissue of chronic arthritis and variant arthrosis <121><165>is identified in chondrocytes at the site of cartilage disruption and in situ hybridization. VEGF receptor KDR flt-1 negative, neuropilin-1 negative. VEGF protein was detected in the supernatant of cartilage tissue culture, and the production of cultured chondrocytes was confirmed. The positive rate of VEGF staining in chondrocytes was significantly correlated with Mankin score (n=32,r= 0.827, p <0.0001), and the degree of cartilage damage was significantly correlated with Mankin score. (2).VEGF protein binding protein and VEGF_<165>bait in GAL4-based yeast two hybrid system. The positive property is shown in the following: 162 ° C, 128 ° C, 128 ° C, 1 The binding energy of <121>VEGF <165>and VEGF is very high. The <165>proliferation activity of vascular endothelial cells and the decomposition and activity of MMP in VBGF_2 complex were investigated.