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ADAMTS4(aggrecanase-1)の軟骨組織内活性調節因子の網羅的探索

全面搜索软骨组织中的 ADAMTS4 (aggrecanase-1) 活性调节剂

基本信息

批准号：
15659362
负责人：
岡田保典
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

軟骨プロテオグリカン(アグリカン)分解酵素であるADAMTS4(アグリカナーゼ-1)の結合タンパクをスクリーニングし、そのアグリカン分解活性を制御する分子を探索した。ADAMTS4のC末端部スペーサードメインは他のADAMTS分子と相同性がほとんどないことから、スペーサードメインをベイトにして酵母two hybrid systemによりヒト軟骨組織cDNAライブラリーをスクリーニングした。その結果、陽性を示したクローンの20%はフィブロネクチンであり、その結合はクロスリンカーを用いた実験で証明された。また、酵母two-hybrid assayとリコンビナントADAMTS4およびその欠失ミュータントを用いた結合アッセイの実験から、それぞれの分子のC末端部で結合することが明らかにされた。ADAMTS4を発現するトランスフェクタントでは、分泌されたADAMTS4は細胞膜表面でフィブロネクチンと共存することが共焦点顕微鏡で観察されたのに対し、スペーサードメインを欠失した分子では共存はみられなかった。ADAMTS4のアグリカナーゼ活性は、ADAMTS4をフィブロネクチンと予めインキュベートすると完全に阻害され、フィブロネクチンのC末端フラグメントとの結合でも同様な阻害が認められた。これらの結果は、フィブロネクチンがADAMTS4とそれぞれの分子のC末端同士の結合により、ADAMTS4のアグリカン分解活性を阻害することを初めて示しており、ADAMTS4の細胞膜表面での活性制御機構として重要と考えられる。現在、酵母two hybrid systemによりスクリーニングされたフィブロネクチン以外のタンパクに関して、結合実験と活性阻害実験を行った。

To explore molecules that regulate the activity of ADAMTS4(ADAMTS-1) and its binding enzymes in cartilage degradation. ADAMTS4 C-terminal selection and identification of ADAMTS molecules and their similarity are discussed in detail below. 20% of the results show that there is a positive correlation between the number of cells and the number of cells. In addition, due to the fact that the yeast two-hybrid assay, Reliance ADAMTS4 and other microchips can be used in conjunction with the Internet, it has become clear that the C-terminal portion of the other molecules can be bound. ADAMTS4 is detected by confocal microscopy and secreted from the cell membrane. ADAMTS 4 is a fully reactive, fully These results indicate that ADAMTS4 is an important inhibitor of the C-terminal binding of ADAMTS4 and its catalytic activity on the cell membrane surface. Now, the yeast two hybrid system can be used to control the activity of yeast.