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細胞外環境モジュレーター分子ADAMの機能解析

细胞外环境调节分子ADAM的功能分析

基本信息

批准号：
18060038
负责人：
岡田保典
金额：
$ 5.12万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ADAM(a disintegrin and metalloproteinase)遺伝子ファミリーに属するADAM28について、disintegrin-like domain〜secreted-specific domainをbaitにした酵母two-hybrid法でP-selecting lycoprotein ligand-1 (PSGL-1)をスクリーニングし、binding assay、免疫沈降法および免疫染色法によるデータから両者の結合を証明した。さらに、両分子の結合部位を決定するとともに、PSGL-1を発現するHL-60細胞を用いて、ADAM28がPSGL-1との相互作用によりPSGL-1発現細胞の血管内皮細胞への接着促進作用を有することをin vitroとin vivoで証明した。また、生体内でのADAM28の産生源を検索したところ、肺炎、虫垂炎、胆嚢炎、関節リウマチ滑膜の各組織において、細動静脈の内皮細胞にADAM28の発現を免疫染色で認め、それぞれの非炎症部位では陰性であった。培養内皮細胞を用いてPMAや種々の炎症性サイトカイン処理したところ、PMAとTNF-αがADAM28発現を誘導した。また、これらのサイトカイン刺激した内皮細胞培養液をHL-60細胞に添加すると、HL-60細胞のP-selectinへ接着充進がみとめられた。これらのことから、炎症局所では、刺激性サイトカインで血管内皮細胞が刺激を受け、内皮細胞で産生されたADAM28がPSGL-1との結合により白血球の血管内皮への接着・浸潤を促進する可能性が示唆された。一方、ADAM12は変形性関節症の関節軟骨細胞で高発現され、insulin-like growth factor (IGF) bindingprotein-5を選択的に切断することで、IGF-1の活性を九進させて軟骨細胞の増殖に関わることを明らかにした。

ADAM(a disintegrin and metalloproteinase) is a member of ADAM28. The yeast two-hybrid method is used to detect P-selecting lycoprotein ligand-1 (PSGL-1). The binding assay, immunoprecipitation assay and immunostaining method are used to detect the binding of P-selecting lycoprotein ligand-1. The interaction between ADAM28 and PSGL-1 in HL-60 cells and the promotion of vascular endothelial cell growth in PSGL-1-producing cells was demonstrated in vitro. ADAM28 production sources in vivo were identified by immunostaining in synovial tissues, arterioles and endothelial cells of pneumonia, inflammation, cholecystitis and joints, and ADAM28 production was negative in non-inflammatory sites. Cultured endothelial cells were treated with PMA and TNF-α to induce ADAM28 expression. HL-60 cells were cultured in endothelial cell culture medium and then filled with P-selectin. This indicates the possibility that inflammation may result in stimulation of vascular endothelial cells, endothelial cell production, ADAM28, PSGL-1 binding, and subsequent infiltration of leukocytes into vascular endothelium. ADAM12 is highly expressed in articular chondrocytes of patients with atypical arthritis, and insulin-like growth factor (IGF) binding protein-5 is selected to block IGF-1 activity in chondrocytes.

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Bone growth retardation in mouse embryos expressing human collagenase 1

DOI：
10.1152/ajpcell.00213.2007
发表时间：
2007-10-01
期刊：
AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-CELL PHYSIOLOGY
影响因子：
5.5
作者：
Imai, Kazushi;Dalal, Seema S.;D'Armiento, Jeanine
通讯作者：
D'Armiento, Jeanine

Purification of matrix metalloproteinases by column chromatography

DOI：
10.1038/nprot.2008.74
发表时间：
2008-01-01
期刊：
NATURE PROTOCOLS
影响因子：
14.8
作者：
Imai, Kazushi;Okada, Yasunori
通讯作者：
Okada, Yasunori

Binding of ADAM28 to P-selectin glycoprotein ligand-1 enhances P-selectin-mediated leukocyte adhesion to 。dothelial cells.

ADAM28 与 P-选择素糖蛋白配体-1 的结合可增强 P-选择素介导的白细胞粘附。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
J. Biol. Chem. 282
影响因子：
0
作者：
Shimoda M.;Hashimoto G; Mochizuki S.;Dceda E.;Nagai N.;Is hida S. and Okada Y.
通讯作者：
Is hida S. and Okada Y.

TNF A-converting enzyme (TACE/ADAM17) inactivation in mousemyeloid cells prevents lethality from endotoxin shock.

小鼠骨髓细胞中 TNF A 转换酶 (TACE/ADAM17) 失活可防止内毒素休克导致死亡。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
J. Immunol. 179
影响因子：
0
作者：
Horiuchi K.;Kimura T.;Miyamoto T.;Takaishi H.;Okada Y;Toyama Y. and Blobel C.P.
通讯作者：
Toyama Y. and Blobel C.P.

ADAM28 is overexpressed in human non-small cell lung carcinomas and correlates with cell proliferation and lymph node metastasis