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MAPキナーゼカスケードを構成するシグナル分_2を標的とした細胞増殖阻害物質の検索

寻找针对构成 MAP 激酶级联的信号成分_2 的细胞生长抑制剂

基本信息

批准号：
11140258
负责人：
河野通明
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ERK-MAPキナーゼ系が恒常的に活性化されている癌細胞株において特徴的に、MEK阻害剤(PD98059)処理でそれを特異的に遮断することで、単相培養、及び軟寒天中でのコロニー形成の何れかにおいても、著しい増殖抑制が認められた。周期動態の解析より、上記癌細胞においてPD98059添加24時間でほぼ完全なG1期停止、48時間以降ではDNA含量の少ないSub-G1細胞の出現を認め、さらに96時間後ではアポトーシスに特徴的な核の分断化、クロマチンの凝縮、さらに核DNAのヌクレオソーム単位への断片化を確認した。PD98059はヒト二倍体繊維芽細胞に対してもある程度の増殖阻害作用を示したが、それは薬物の除去によって速やかに回復し、またアポトーシス様細胞の出現は決して認められなかった。これらの結果は、MAPキナーゼ活性が顕著に上昇している癌細胞に対して、MAPキナーゼ系を特異的遮断する薬剤が実際に「制癌」につながる可能性を示唆するものである。2.PD98059処理した上記癌細胞のG1期集積の分子機構を、幾つかのG1期調節蛋白質に焦点を当てて解析した。その結果、PD98059処理12〜24時間後よりサイクリンA、サイクリンB1の発現量の減少、RB蛋白質のリン酸化の減少、さらにp27^<Kip1>の発現上昇を認めた。ERK-MAPキナーゼに特異的なフォスファターゼ、MKP-3の過剰発現によってもp27^<Kip1>の発現上昇を認め、これがERK-MAPキナーゼ系の特異的遮断による上記癌細胞の増殖阻害(G1期停止)、さらにアポトーシス誘導の原因となっている可能性が示唆された。3.PD98059の基本骨格をもとにして2'-アミノチオフラボン誘導体を合成し、それらのMEK阻害活性を測定した結果、PD98059と比較してより強力なMEK阻害活性を示す幾つかの化合物を見出した。

1.ERK-MAP inhibitor is a specific inhibitor of ERK-MAP inhibitor (PD98059) in cancer cell lines characterized by constant activation, single-phase culture, and soft cold weather. The analysis of cycle dynamics of PD98059 cancer cells described above showed that 24 hours after addition, complete G1 phase arrest, 48 hours after reduction of DNA content, appearance of Sub-G1 cells, 96 hours after addition of PD98059, nuclear fragmentation, condensation, and fragmentation of nuclear DNA were confirmed. PD98059 is a new type of cell that can be used to control the growth of diploid cells. As a result, MAP activity increased significantly in cancer cells and MAP system specific inhibitors were found to indicate the possibility of cancer suppression. 2. PD98059 treatment was used to analyze the molecular mechanism of G1 phase accumulation in cancer cells and the focus of G1 phase regulatory proteins. The results showed that after PD98059 treatment for 12 ~ 24 hours, the amount of protein A and protein B1 decreased, the amount of protein B decreased, and the amount of protein p27 increased<Kip1>. Recognizing the specific ERK-MAP kinase and the increased detection of p27 in the presence of MKP-3<Kip1>, this raises the possibility that the specific blockade of the ERK-MAP kinase system may be responsible for the inhibition of cancer cell proliferation (cessation of G1 phase) and the induction of apoptosis. 3. PD98059 was synthesized as a basic matrix, and its MEK inhibition activity was measured. The results showed that PD98059 had strong MEK inhibition activity.