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テロメラーゼ阻害剤による制癌と癌細胞におけるテロメラーゼ活性制御機構

端粒酶抑制剂的癌症防治及癌细胞端粒酶活性的调控机制

基本信息

批准号：
11140278
负责人：
清宮啓之
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140278/
关键词：
テロメラーゼテロメラーゼ阻害剤癌分子標的

项目摘要

テロメラーゼは9割以上の癌で活性が検出され、殆どの正常体細胞では検出されない理想的な癌分子標的である。本計画では、テロメラーゼを分子標的とした癌治療法の確立を目指し、テロメラーゼ阻害剤およびテロメラーゼ結合蛋白質について基礎的検討を行った。その結果、以下の点が明らかになった。1.TRAP-COMPARE解析により、強力なテロメラーゼ阻害効果(IC50=2microM)を示す化合物としてFJ5002を同定した。白血病U937細胞を非致死的濃度のFJ5002存在下で継代培養すると、population doublingの増加に応じてテロメアの短縮が認められた。テロメアが限界付近まで短縮した細胞では、染色体異常・老化形質・crisisなどの特徴的な変化が認められた。以上のように、テロメラーゼが癌化学療法の新たな分子標的として実質的に有用である可能性が示された。2.酵母two hybrid法によりテロメラーゼ触媒サブユニットhTERT結合蛋白質を探索したところ、hTERTのカルボキシル末端と特異的に結合する因子として14-3-3蛋白質が単離された。hTERTと14-3-3は実際のヒト細胞内においても複合体を形成していることが確認された。14-3-3は自身のアミノ末端を介して二量体を形成するが、同アミノ末端部位を欠いた変異(dominant negative)型14-3-3を293T細胞に発現させると、hTERTの核内移行が顕著に阻害された。同様に、14-3-3非結合型hTERT(hTERT-3A)は、細胞内において核内移行の効率低下を示した。なお、hTERT-3Aは野生型hTERTと同レベルのテロメラーゼ活性を示した。以上より、14-3-3はhTERTの細胞内局在を調節することによりテロメラーゼの機能を制御している可能性が示唆された。

The activity of cancer cells with more than 9 cuts was detected, and the ideal cancer molecular target was detected in normal somatic cells. This project aims to establish a molecular target for cancer therapy, and to investigate the basis of protein binding. The results are as follows: 1.TRAP-COMPARE analysis, strong resistance effect (IC50 =2microM) and FJ5002 are determined. Leukemia U937 cells were cultured in the presence of FJ5002 at non-lethal concentrations, and population doubling increased, resulting in shortening and shortening. The characteristics of chromosome abnormality, aging, crisis, etc. The above is an indication of the potential of new molecular targets for cancer chemotherapy. 2. Yeast two hybrid method for the detection of hTERT binding protein, hTERT and hTERT terminal-specific binding factor 14-3-3 protein separation hTERT 14-3-3 is the first time that a complex has been formed in a cell. 14-3-3 is the dominant negative type of 14-3- 293T cells, and the intracellular migration of hTERT is blocked. Similarly, the 14-3-3 unconjugated hTERT(hTERT-3A) showed a low rate of intracellular migration. hTERT-3A is a wild-type hTERT that exhibits high activity. The above, 14-3-3, shows the possibility of regulating the intracellular functions of hTERT.