セントロメア機能における特殊DNA高次構造とCENP-Cの役割

特殊DNA构象和CENP-C在着丝粒功能中的作用

• 批准号: 11143212
• 负责人: 池村 淑道
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11143212/
• 关键词: セントロメア; 染色体工学; 細胞分裂; CENP-C; 染色体分配; 遺伝子ノックアウト; DT-40; 細胞周期

セントロメアは染色体分配に本質的な役割を行うDNA-タンパク質の複合体である。高等脊椎動物のセントロメアの機能を実現している構造の実体については、未知に残された課題が多くある。今年度は進化的に配列が保存されたセントロメアタンパク質であるCENP-Cに注目し、その機能解明を試みた。ニワトリB細胞由来のDT40細胞は、哺乳類細胞に比べて、数十から数百倍の頻度で相同組換えを起こすことが知られている。その特徴を利用しDT40細胞を用いて、CENP-Cの条件ノックアウト株を作製した。またテトラサイクリンのシステムを用いて、CENP-Cの条件的大量発現株も作製した。これらの株の表現型を詳細に解析した結果、CENP-Cは細胞分裂中期から後期の移行に必須であり、染色体凝縮に関与していることが示唆された。また、CENP-Cは機能的セントロメアの形成のために必須であるが、CENP-C単独で容易にセントロメア形成を誘導しないという結果が得られた。さらに、CENP-Cの酵母ホモログであるMif2の温度感受性変異を指標にして、各種変異を導入した変異CENP-CをDT40細胞に導入した。この方法によって、現在まで4種類のCENP-C温度感受性変異細胞株を単離できた。この株の表現型の詳細な解析と、これらの変異を抑圧する遺伝子のスクーリングが進行中である。

セ ン ト ロ メ ア は に chromosome distribution line cut を う DNA - essential な service タ ン パ ク qualitative の complex で あ る. Higher vertebrates の セ ン ト ロ メ ア の function を be presently し て い の る structure be body に つ い て は, unknown に residual さ れ が た subject more く あ る. Our は evolution に match column が save さ れ た セ ン ト ロ メ ア タ ン パ ク qualitative で あ る CENP - C に attention し, そ の function interpret を try み た. ニ ワ ト リ B cell origin の に は DT40 cells, mammalian cells than べ て, dozens of か ら の frequency で hundreds of times in the same group え を up こ す こ と が know ら れ て い る. Youdaoplaceholder0 <s:1> characteristics を using <s:1> DT40 cells を to prepare た て and CENP-C <s:1> conditions ノッ アウト アウト アウト strain を. Youdaoplaceholder0, またテトラサ, リ, リ, システムを are made by using a large number of production strains of て て and CENP-C <s:1> conditions またテトラサ and た. こ れ ら の strains の phenotype を detailed analytical し に た results, mid CENP - C は cell division か ら の late transitional に must で あ り, chromosome condensation に masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. ま た, CENP - C は functional セ ン ト ロ メ ア の form の た め に must で あ る が, easy CENP - C 単 alone で に セ ン ト ロ メ ア form を induced し な い と い う results ら が れ た. さ ら に, CENP - C の yeast ホ モ ロ グ で あ る Mif2 の temperature sensitivity - different を index に し て, various - different を import し た - different CENP - C を DT40 cells に import し た. <s:1> <s:1> method によって, present まで four types of <s:1> CENP-C temperature-sensitive variant cell lines を単 isolated で た た た. こ の strains の phenotype の detailed analytical と な, こ れ ら の - different を 圧 suppression す る heritage 伝 son の ス ク ー リ ン グ が underway で あ る.

项目成果

安藤麻子: "cDNA cloning, Northern hybridization and mapping analysis of a putative GDS (guanine nucleotide dissociation stimulator of G proteins)-related protein gene at the centromeric ends of the human and mouse MHC regions"Immunogenetics. 49. 354-356 (1999

Asako Ando：“人类和小鼠 MHC 区域着丝粒末端推定的 GDS（G 蛋白鸟嘌呤核苷酸解离刺激物）相关蛋白基因的 cDNA 克隆、Northern 杂交和作图分析”《免疫遗传学》49. 354-356 (1999)。

野上正弘: "Intranuclear arrangement of human chromosome 12 correlates to large-scale replication domains"Chromosoma. (in press). (2000)

Masahiro Nogami：“人类 12 号染色体的核内排列与大规模复制域相关”（正在出版）。

大野みずき: "Non-B DNA structures spatially and sequence-specifically associated with individual centromeres in the human interphase nucleus"Chromosomes Today. 13(in press). (2000)

Mizuki Ohno：“非 B DNA 结构在空间和序列上与人类间期核中的单个着丝粒相关”，《今日染色体》13（出版中）。

深川竜郎: "The chicken HPRT gene : a counter selectable marker for the DT40 cell line"Nucleic Acids Research. 27. 1966-1969 (1999)

Tatsuro Fukakawa：“鸡 HPRT 基因：DT40 细胞系的反选择标记”《核酸研究》27。1966-1969 (1999)。

椎名崇: "Molecular dynamics of MHC genesis unraveled by sequence analysis of the 1.8 Mb HLA class I region"Proc Natl Acad Sci USA. 96. 13282-13287 (1999)

Takashi Shiina：“通过 1.8 Mb HLA I 类区域的序列分析揭示了 MHC 发生的分子动力学”Proc Natl Acad Sci USA，96. 13282-13287 (1999)。