遺伝子ベクター開発のための細胞内ソーティング素子のスクリーニング素の構築

用于基因载体开发的细胞内分选元件筛选元件的构建

• 批准号: 12217004
• 负责人: 原島 秀吉
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217004/
• 关键词: 遺伝子ベクター; GALA; エンドソーム; ソーティング

本研究は,「細胞内動態制御シグナルの分子スクリーニングシステムを確立し,人工遺伝子キャリアーの細胞内動態を最適化する」という新しい戦略を提唱し,細胞内各オルガネラ中の遺伝子量を定量的に測定し,各素過程を定量的に評価できるスクリーニング系を確立するとともに,遺伝子の細胞内動態における素過程の最適化を行い,ウイルスを凌駕する人工遺伝子ベクターを開発することを目的とする.1.細胞内動態の素過程の分子スクリーニングシステムの構築:細胞内の遺伝子の分布は,細胞膜,細胞質、エンドソーム・ライソゾーム系そして核が主要な分画である.遺伝子を蛍光ラベルして,リポフェクタミンプラスとの複合体を形成させ,NIH3T3細胞へ導入した.経時的に共焦点レーザー顕微鏡により蛍光マーカーを追跡した.蛍光強度の画像解析は浜松ホトニクスのAQUACOSMOSで定量化を行った.検量線を作成することにより蛍光強度をプラスミドの個数に換算し,個々の細胞において各オルガネラ中の量を定量的に評価する方法を確立した.2.人工遺伝子キャリアーの細胞内動態の素過程に関する最適化:遺伝子の細胞内動態の中でも主要なバリアーの一つであるエンドソームから細胞質中への遊離過程に着目し,エンドソーム遊離過程を促進させるソーティング素子として,ウイルス由来の膜融合ペプチドGALAを合成した.GALAをリポソームの水層に封入したところ,顕著な促進効果は見られなかった.そこで,GALAを脂質誘導体とし,リポソーム膜に封入した.その結果,リポソームに封入した水層マーカーの細胞質中への遊離を顕著に促進させることが明らかとなった.

In this study, the results of this study are as follows: (1) in this study, the intracellular dynamic control system, the molecular monitoring system, the monitoring system, the artificial control system, and the quantitative determination of the molecular weight in the cell were studied in this study. in this study, the results of this study are as follows: in this study, the intracellular dynamic control system is used to make sure that the intracellular dynamics is the most efficient in the cell. The process of intra-cellular dynamic monitoring is optimized, and the manual operation is performed. 1. The process of intracellular kinetin is known as the distribution of intracellular kinetin, cell membrane, cell membrane and cell membrane. This is the first time that the complex has been formed, and the NIH3T3 cells have been inserted into it. At that time, the confocal signal is in full focus, and the light is in full swing. "Light intensity" Portrait Analysis "Hamamatsu", "Bamatsu", "AQUACOSMOS" quantitative "line". The quantity is calculated in terms of light intensity, light intensity, and the number of units, and the method of quantitative measurement in each cell is established by the method of quantitative measurement. 2. The process of intracellular dynamics is optimized: the main components of the intracellular dynamics of the cell are monitored. The process of isolation is focused on, and the process of isolation is focused on. The reason for this is that the membrane is fused, the GALA is synthesized. Gala, the water is sealed, and the results are improved. Make sure that the membrane is sealed, and that the membrane is sealed. The results show that the information is sealed in the cell of the water system, and the information is improved.

项目成果

T.M.Huong 他: "The complement system enhances the clearance of phosphatidylserine (PS) -liposomes in rat and guinea pig."Int.J.Pharm.. (印刷中). (2001)

T.M.Huong 等人：“补体系统增强了大鼠和豚鼠体内磷脂酰丝氨酸 (PS) 脂质体的清除。”Int.J.Pharm..（出版中）。

原島秀吉 他: "血中滞留性リポソームによる抗癌剤の処方設計における最適化"Drug Del.Sys.. 15. 437-442 (2000)

Hideyoshi Harashima 等：“使用血液保留脂质体优化抗癌药物的制剂设计” Drug Del.Sys.. 15. 437-442 (2000)

H.Harashima 他: "Controlling the Intracellular Trafficking of DNA Using Liposomes as Drug Carriers"Eur.J.Pharam.Sci. (印刷中).

H. Harashima 等人：“使用脂质体作为药物载体控制 DNA 的细胞内运输”，Eur. J. Pharam Sci。

原島秀吉: "物理化学的視点からみた薬物の分布"月刊薬事. 42. 2407-2411 (2000)

Hideyoshi Harashima：“从物理化学角度看药物分布”月刊药事42。2407-2411（2000）。

T.Ishida 他: "Biodistribution of liposomes and C3 fragments associated with liposomes : evaluation of their relationship"Int.J.Pharm.. 205. 183-193 (2000)

T. Ishida 等：“脂质体和与脂质体相关的 C3 片段的生物分布：它们关系的评估” Int. J. Pharm.. 205. 183-193 (2000)