in vivoで機能するがん治療用MENDの創製

创建可在体内发挥作用的用于癌症治疗的 MEND

• 批准号: 10F00421
• 负责人: 原島 秀吉
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10F00421/
• 关键词: GALA; 非ウイルスベクター; 血管内皮細胞; MEND; siRNA; 肺転移; 遺伝子ノックダウン; 肺; デリバリー; 核酸医薬

昨年度までの研究により、元来エンドソーム脱出を促進するための素子として開発されてきたGALAペプチドがリボソームの肺移行性を促進する有力な素子であることを見いだしている。さらに、その機構を明らかとした結果、本粒子は血液中を凝集せずに循環し、さらにその細胞への取り込みには、細胞膜上のシアル酸末端糖鎖が関与することを明らかとしている。一方、これまで、我々は、脳毛細血管内皮細胞を用いた検討によりApical側(血管側)からBasal側(脳実質側)までのリボソームの輸送を可能とするペプチド(Clone95)の同定に成功している。本素子は、血管内皮細胞のカベオラ経路を標的化する素子として期待される。そこで、GALAペプチドとClone95の併用により、肺毛細血管内皮細胞を透過し、上皮細胞まで送達可能なシステムの構築を試みた。共焦点レーザー顕微鏡により血管透過を可視化するため、蛍光標識されたリボソームの肺内分布を解析した。GALA修飾リボソームの殆どが血管内皮のシグナルと共局在する様子が観察された。一方、さらにCL95を修飾した粒子においては、赤色単独で観察される点が観察された。CL95の修飾により肺組織内における分布が変化し、血管から一部上皮細胞まで移行することが示唆された。本上皮細胞への移行を機能の点から解析するために、本粒子内に上皮細胞の特異的マーカーであるEpCAMに対するsiRNAを導入したリボソーム粒子を構築した。本粒子を2mg/kgとなるように尾静脈内投与し、その後の遺伝子ノックダウン効果を解析した。従来のGALA-MENDに関しては、遺伝子ノックダウン効果が認められなかったのに対し、CL95/GALA-MENDに関しては、まだ弱いながらも有為な遺伝子ノックダウン効果が認められた。これらの結果から、CL95/GALA-MENDは、血中投与により肺の実質細胞(上皮細胞)を標的化可能なシステムであることが示唆された。

Yesterday's annual ま で の research に よ り, yuan to エ ン ド ソ ー ム out を promote す る た め の element child と し て open 発 さ れ て き た GALA ペ プ チ ド が リ ボ ソ ー ム の transitional lung を promote す る powerful な element child で あ る こ と を see い だ し て い る. さ ら に, そ の institutions を Ming ら か と し た results, the particle を は blood agglutination せ ず に circulating し, さ ら に そ の cells へ の take り 込 み に は, membrane の シ ア ル sugar acid end lock が masato and す る こ と を Ming ら か と し て い る. Party, こ れ ま で, I 々 は, を 脳 capillary endothelial cells with い た beg に 検 よ り Apical lateral side (blood vessels) か ら Basal hominins side (脳 be mass side) ま で の リ ボ ソ ー ム の conveying を may と す る ペ プ チ ド (Clone95) with fixed に の successful し て い る. This hormone ラ, vascular endothelial cells <s:1> カベ ラ ラ pathway を standardized する hormone と て て expected される. そ こ で, GALA ペ プ チ ド と Clone95 の and に よ を り, pulmonary capillary endothelial cells through し, epithelial cells ま で served may な シ ス テ ム の build を try み た. Total focus レ ー ザ ー 顕 micromirror に よ り blood vessels through を visualization す る た め 蛍 light logo さ れ た リ ボ ソ ー ム の lungs distribution を parsing し た. GALA modifies リボソ リボソ ム ム, <s:1> が vascular endothelium and <s:1> シグナ と と are co-localized in する sample が観 and された. One party, さ ら に CL95 を modified し た particle に お い て は, red 単 alone で 観 examine さ れ る point が 観 examine さ れ た. CL95 の modified に よ り lung tissues に お け る distribution が - し and vascular か ら a epithelial cells ま で す of the transitions る こ と が in stopping さ れ た. Function of the epithelium へ の transitional を の point か ら parsing す る た め に, this particle に epithelial cells の specific マ ー カ ー で あ る EpCAM に す seaborne る siRNA を import し た リ ボ ソ ー ム particle を build し た. The effect of this particle, を2mg/kgとなるように, administered intravenously to <s:1> and そ, in the tail vein, followed by the subsequent administration of 伝 seed ノッ ダウ ダウ <e:1> を を を を を を を を を を を た analysis of た た. 従 to の GALA - MEND に masato し て は, but 伝 ノ ッ ク ダ ウ ン unseen fruit が recognize め ら れ な か っ た の に し, seaborne CL95 / GALA - MEND に masato し て は, ま weak だ い な が ら も for な heritage 伝 son ノ ッ ク ダ ウ ン unseen fruit が recognize め ら れ た. こ れ ら の results か ら, CL95 / GALA - MEND は cic, blood and に よ り lung の be stromal cells (epithelial cells) can be な を mark シ ス テ ム で あ る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Effect of the Anchor in Polyethylene Glycol-Lipids on the Transfection Activity of PEGylated Cationic Liposomes Encapsulating DNA

聚乙二醇脂质中的锚对包裹DNA的聚乙二醇化阳离子脂质体转染活性的影响

• DOI: 10.1248/bpb.35.445
• 发表时间: 2012
• 期刊: Biological and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 2
• 作者: Kusumoto K;Akita H;El-Sayed A;Harashima H
• 通讯作者: Harashima H

多機能性エンベロープ型ナノ構造体に基づくナノ医療への展開期

基于多功能包封纳米结构的纳米医学发展阶段

• 发表时间: 2012
• 作者: Kusumoto K;Akita H;El-Sayed A;Harashima H;原島秀吉
• 通讯作者: 原島秀吉

Stearylated INF7 peptide enhances endosomal escape and gene expression of PEGylated nanoparticles both in vitro and in vivo

• DOI: 10.1002/jps.22807
• 发表时间: 2012-02-01
• 期刊: JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES
• 影响因子: 3.8
• 作者: El-Sayed, Ayman;Masuda, Tomoya;Harashima, Hideyoshi
• 通讯作者: Harashima, Hideyoshi