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α1A-Caチャンネル遺伝子の変異による脳細胞変性の分子病態

α1A-Ca通道基因突变引起脑细胞变性的分子病理学

基本信息

批准号：
13210046
负责人：
水澤英洋
金额：
$ 4.93万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

目的および背景:脊髄小脳失調症6型(SCA6)は、多くの神経変性疾患の中でもその原因遺伝子機能が判明している数少ないものの一つであり病態解明に至る可能性が高く、進行性変性症の他発作性症候も呈するなど多彩な神経障害を来たしその機序の解明は科学的インパクトが大きい。またSCA6は本邦に多くニーズも大きい。我々は第19番染色体連鎖小脳失調症を同定、それがSCA6と同一であることやCAGリピート伸長の病的意義を明らかにし、SCA6のプルキンエ細胞質内封入体を発見、Caチャンネル機能の異常を初めて報告するなど一連の研究を続けている。本研究の目的は、培養細胞ならびに動物モデルを作製してα1A-Caチャンネル遺伝子(CACNA1A)の変異による脳細胞変性と機能障害の分子病態を解明することである。方法:まず、これまで用いていたHEK細胞にてSCA6遺伝子を導入し、細胞死を生じる条件を検索し、そのメカニズムを探る。また、変異lox配列をマウスcacnalaエクソン1に導入したES細胞を単離し、変異lox配列、CAGの異常伸長したヒトCACNA1Aの全長cDNA、およびハイグロイマイシン耐性遺伝子を組み込んだノックインベクターとCreリコンビナーゼの発現ベクターとを同時に導入し、マウスcanalaエクソン1にSCA6変異を持つヒトCACNA1AcDNAを挿入した。予想されるパターンでのcDNAの挿入はサザンハイブリダイゼーションとPCR法により確認した。SCA6の変異CACNA1Aを有するES細胞を多数得て胚盤胞へ移植しSCA6のノックインマウスを得る。結果と考察:HEK細胞にてSCA6遺伝子変異を導入して細胞死を生じさせることに成功し、現在そのメカニズムの解明を進めている。また、SCA6のノックインマウスを得ることに成功し、現在症候、チャンネル機能障害、神経病理所見などの表現型の解析を行っている。

Purpose: Background: Spinal syndrome type 6 (SCA6), multiple neurological disorders The cause of the disease is still there, but the function of the child is still clear. The number of patients is small. There is a high possibility of illuminating the disease, and there are no other symptoms of progressive disease.ど色な神経 hinders を来たしその机码の解明はSCIENTIFIC インパクトが大きい.またSCA6は本国に多くニーズも大きい. The significance of my 々は19th chromosome-linked microbial disorder を同定、それがSCA6 と同であることやCAG リピートelongation disease を明らかにし, SCA6 is enclosed in the cytoplasm of the body, and the abnormality of Ca チャンネル function is reported at the beginning of the study. The purpose of this study is to culture the cells and produce the α1A-Ca チャンネル缝子 by the animal モデルを(CACNA1A) is a molecular pathological diagnosis of cellular dysfunction and dysfunction. Methods: HEK cells were introduced using HEK cells and the cells were dead and regenerated under the condition of じる.また、変isolox arrangementをマウスcacnalaエクソン1にINTRODUCTIONしたES cellsを単利し、変isolo x arrangement, abnormal elongation of CAG, full-length cDNA of CACNA1A, and resistance to Sexual legacy 伝子を组み込んだノックインベクターとCreリコンビナーゼの発成ベクターとをsimultaneous importし、マウスcanalaエクソン1にSCA6変differentをholdつヒトCACNA1AcDNAをinsertした. I want to insert the cDNA into the cDNA and confirm it using the PCR method. SCA6 is different from CACNA1A, so many ES cells are obtained and the blastoderm cells are transplanted, so SCA6 can be transplanted. Results and investigation: The HEK cells were successfully introduced into the HEK cells and the cells were dead and alive.また、SCA6のノックインマウスを得ることにsuccessし、Symptoms now,チャンネル dysfunction, neurological pathology findings and analysis of the phenotype of the disease.