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カドヘリン依存細胞接触による細胞膜ラフリング及び運動の制御機構

钙粘蛋白依赖性细胞接触控制细胞膜波纹和运动的机制

基本信息

批准号：
07F07621
负责人：
竹市雅俊
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

U251グリア腫細胞株を用いて、細胞接触に依存した細胞運動の停止に関する分子機構の研究を続行した。前年度までに、細胞運動の制御因子Nap1が細胞接触時に、細胞周縁部から消失すること、また、これがN-cadherinおよびその機能を支えるαE-cateninに依存することを明らかにしていた。今年度は、この細胞に、Nap1-GFPを導入して、細胞接着時における勲態をライブイメージングにより観察した。その結果、細胞接触時、Nap1-GFPが速やかに細胞周縁部から消失するだけでなく、細胞質に拡散することを確認した。さらに、αE-cateninを除去した細胞ではこの消失が抑制された。一方、N-cadherinの除去ではNap1-GFPの挙動に対する効果が弱かったので、他のカドヘリンが存在する可能性が示唆された。実際、種々のカドヘリンに結合するβ-cateninが、N-cadherinノックダウン細胞の細胞間境界に観察された。そこで、U251細胞からβ-catenin共沈物を集め質量分析した結果、R-cadherinが含まれていることが分かった。これにより、カドヘリンの、接触依存運動停止における役割について、より精密に解析することが可能になった。本研究終了後は、Nap1が細胞接触領域から消える分子メカニズムについて理解を深めるため、両カドヘリン除去前後におけるNap1結合因子の違いを、質量分析により調べる実験を計画している。

U251 cell lines are used to study molecular mechanisms involved in cell movement dependent on cell contact. In the past year, the control factor of cell movement, Nap1, disappeared when the cell was contacted, and the function of N-cadherin was supported by αE-catenin. This year, Nap1-GFP was introduced into the cells, and the cells were then detected in the presence of a host cell. Results: When cells are contacted, Nap1-GFP is rapidly removed from the periphery of the cell and is dispersed into the cytoplasm. In addition, αE-catenin can be removed from the cells. On the one hand, the removal of N-cadherin indicates the possibility of weak response to Nap1-GFP and the presence of other Nap1-GFP. In fact, the intercellular boundary between the two cells was observed by β-catenin and N-cadherin binding. U251 cells contain β-catenin co-precipitate. Mass analysis results show that R-cadherin contains β-catenin co-precipitate. This is the case with contact dependent motion stops, precise resolution, and possible motion. At the end of this study, the Nap1 binding factor was removed before and after the cell contact domain was removed, and the quality analysis was performed.