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発癌プロモーターとプロテインキナーゼCとの結合様式の有機化学的解析

致癌启动子与蛋白激酶C结合模式的有机化学分析

基本信息

批准号：
06240228
负责人：
入江一浩
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテインキナーゼC(PKC)は、細胞内情報伝達におけるキ-エンザイムであると同時に、強力な発癌プロモーター・フォルボールエステルの主要なターゲットとしても注目されている。最近、フォルボールエステルはPKCの調節領域(C1領域)に結合することが示されてきているが、その結合に関与しているアミノ酸残基は全く不明である。光アフィニティーラベリングはこの問題を解明するための一手段であることから、本研究においては、多彩な光反応性フォルボールエステルとともに、光アフィニティーラベリングに用いるPKCモデルペプチドを合成した。これまでの構造活性相関の知見に基づき、光反応性ジアゾアセチル基をフォルボールの3、12、あるいは13位に導入した新しいプローブ3種類を合成した。これらのプローブのメタノール中での光照射実験により、ジアゾアセチル基特有のWolff転位があまり起こらないことが判明し、光反応性プローブとして十分使用可能であることが示唆された。これらのトリチウム標識は二酸化マンガンにより20位アルデヒド体としたのち、市販のトリチウム標識水酸化ホウ素ナトリウムを用いることにより達成された。ところで光アフィニティーラベル実験には少なくとも10mg程度の純粋な酵素標品が必要であるが、多くのアイソザイムからなるPKCではそれを天然より得ることはきわめて困難である。そこでPKCのC1領域に存在するシステインに富んだ配列を持ったペプチドを複数合成したところ、ラット脳PKCγの101番目から151番目のアミノ酸からなる僅か51残基のペプチドがフォルボールエステルに大して天然のPKCの約1/50という高い結合能を有し、かつきわめてよく似た生化学的性質を有することを初めて見いだした。今回合成したプローブはいずれもこのPKCモデルペプチドに有意に結合した。

In addition, the protein C(PKC) can also be used to detect and detect intracellular information. Recently, the protein has been found in the PKC regulatory domain (C1 domain). A method for solving the problem of light reflection is proposed in this paper. In this paper, a method for synthesizing light reflection is proposed. The structure activity related knowledge base, light reflection base, 3, 12, 13 positions are introduced into the structure activity related knowledge base. The light irradiation in the light source is very difficult to detect. The 20-digit mark is used to mark the acid content of the product. It is necessary to use PKC as the enzyme standard with the purity of 10mg. It is difficult to use PKC as the natural standard. The C1 domain of PKC is rich in amino acid residues and has a high binding energy of about 1/50 of that of natural PKC. This time around, the PKC was deliberately combined with the original.