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新規チクングニアウイルス感染関連細胞性因子の機能解析

新型基孔肯雅病毒感染相关细胞因子的功能分析

基本信息

批准号：
19K08929
负责人：
田中淳
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでノックアウト細胞ライブラリーを用いて行ったゲノムワイドスクリーニングで得られたチクングニアウイルス（CHIKV）感染への関与が疑われる膜蛋白質遺伝子の候補についてCHIKV感染におけるその効果を検討した。当該膜蛋白質のノックアウト細胞への野生型CHIKV Thai#16856臨床分離株の有意な感染の低下と、ノックアウト細胞への当該遺伝子発現ベクターを導入したノックイン細胞でCHIKV感染感受性の回復が観察されたこと、及びこの膜蛋白質とCHIKV外皮膜膜蛋白質とが免疫沈降実験で共沈してきたことから、当該膜蛋白質がCHIKVの宿主細胞への侵入に関与している可能性が考えられた。一方、牛水疱性口内炎ウイルス（VSV）やマウス白血病ウイルス（MuLV）といった別種のウイルスの外皮膜にCHIKV外皮膜膜蛋白質を発現した組み換えシュードタイプウイルスベクターを用いた感染試験では、CHIKV感受性細胞株と当該細胞性因子のノックアウト細胞との間でこれらシュードタイプウイルスの感染性に差がみられず、当該膜蛋白質がCHIKVの細胞内ウイルス増殖に関与している可能性も出てきた。このため当該膜蛋白質遺伝子のノックアウト細胞並びにノックイン細胞でのCHIKV増殖について検討したところ、それぞれの細胞でのCHIKV増殖率に違いは認められなかった。本研究で作製した増殖欠損型CHIKV発現プラスミドを用いた研究及び、EGFP標識CHIKVウイルス様粒子を用いた研究により、当該膜蛋白質が野生型CHIKV Thai#16856臨床分離株のcell-to-cell感染、または複数のウイルス粒子が同時に宿主細胞へ侵入できる状態での感染経路に関与している可能性を示すデータを得ることが出来た。今後はさらなる実験系を用いてこの膜蛋白質のCHIKV感染における役割について検討していく必要がある。

This article discusses the relationship between CHIKV infection and the candidate for CHIKV infection. When the membrane protein is expressed in the wild-type CHIKV Thai #16856 clinical isolate, the expression of the protein is detected in the cells, and the response to CHIKV infection is detected in the cells. When this membrane protein is involved in the invasion of CHIKV into host cells, the possibility is examined. CHIKV outer membrane protein expression in the outer membrane of bovine vesicular endostomatitis (VSV), leukemia (MuLV), and other species of CHIKV outer membrane protein expression in the outer membrane of CHIKV outer membrane protein expression in the outer membrane protein expression in the outer membrane of CHIKV outer membrane protein expression When this membrane protein is involved in the intracellular proliferation of CHIKV, it is possible to develop it When the membrane protein gene is used in the cell and the CHIKV proliferation rate in the cell is detected, the CHIKV proliferation rate in the cell is detected. In this study, we investigated the use of EGFP marker CHIKV gene particles to identify the membrane protein when it was associated with cell-to-cell infection of wild-type CHIKV Thai #16856 clinical isolate, and to demonstrate the possibility of simultaneous host cell invasion of multiple CHIKV gene particles. In the future, it will be necessary to investigate the use of membrane proteins and CHIKV infection.