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遺伝学・染色体工学的手法による新規セントロメアタンパク質の同定と機能解析

利用遗传学和染色体工程技术鉴定和功能分析新型着丝粒蛋白

基本信息

批准号：
12740415
负责人：
深川竜郎
金额：
$ 1.6万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

セントロメアは染色体分配に本質的な役割を行うDNA-タンパク質の複合体である。高等脊椎動物のセントロメアの研究では、酵母で有用に用いられている遺伝学的機能解析法を用いることが困難であるため、セントロメアタンパク質の細胞内での解析は遅れており、高等脊椎動物のセントロメアの機能を実現する機構については、多くが未知である。我々は、哺乳類細胞の数十から数百倍の高頻度に相同組換えを起こすニワトリB細胞由来のDT40細胞を用いることで、高等脊椎動物のセントロメア機能を遺伝学的に解析することを試みている。昨年度までに、重要なセントロメアタンパク質であるCENP-Cの温度感受性変異株の作成を行い、4種類の変異株の単離に成功した。また、温度感受性変異株がSUMO-1遺伝子の大量発現により、CENP-C変異が抑圧されることを示した。本年度は新規セントロメアタンパク質CENP-Hを同定しその機能解析を行った。はじめに、CENP-Hの遺伝子をCENP-H-GFPに置き換えた細胞株を樹立して、CENP-Hが細胞周期を通じてセントロメアに局在することを明らかにした。次に、DT40細胞でtetシステムを応用してCENP-Hの条件的ノックアウト株を作成し、表現型を解析した。CENP-Hのノックアウト細胞は分裂中期で増殖を停止して死滅した。また、染色体の不等分配や染色体配置に異常が生じた。抗体染色の結果、CENP-HがCENP-Cのセントロメアの局在に必須の働きを行っ.ていることが明らかになった。

The chromosome assignment is essential for the DNA-DNA complex. In the study of higher vertebrate DNA, yeast is useful, and genetic functional analysis is difficult to use. In the analysis of higher vertebrate DNA in cells, the mechanism for the realization of higher vertebrate DNA function is unknown. The frequency of the same component changes in mammalian cells is tens of times higher than that in DT40 cells, the origin of B cells, and the function of higher vertebrates. In the past year, the production of CENP-C temperature-sensitive mutants and the isolation of 4 species of mutants were successful. The results showed that SUMO-1 gene could be produced in large quantities by temperature sensitive plants, and CENP-C gene could be inhibited by temperature sensitive plants. This year, the new regulations on the quality of CENP-H were implemented. CENP-H-GFP is the first gene to be cloned into a cell line. CENP-H-GFP is the first gene to be cloned into a cell line. In addition, DT40 cells were used to analyze the phenotype of CENP-H cells. CENP-H cells stopped growing and died during middivision. Unbalanced distribution of chromosomes and abnormal chromosome configuration The results of antibody staining, CENP-H and CENP-C were analyzed.ていることが明らかになった。