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インターロイキン21とその受容体発現に対するエピジェネティックな制御系の解析

白细胞介素21表观遗传调控系统及其受体表达分析

基本信息

批准号：
17659139
负责人：
浅尾裕信
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659139/
关键词：
エピジェネティクスサイトカイン自己免疫疾患

项目摘要

IL-21は多様な生物活性を示すサイトカインであるが、発現制御機構に関しては不明である。自己免疫性糖尿病を発症するNODマウスではIL-21の産生亢進が自己反応性T細胞の増殖に寄与する可能性が報告された。本研究ではNODマウスでのIL-21遺伝子の発現制御機構、特にDNAメチル化によるエピジェネティックな制御系について解析した。1.初めに、DNAメチル化阻害剤5-アザシチジン(5-aza-C)を用いて、IL-21発現に対する影響を調べた。PMAとionomycine刺激マウスTリンパ腫RL♂1に5-aza-Cを添加したところ、IL-21の発現が亢進した。一般に転写制御領域のDNAメチル化によりサイトカイン産生は抑制されるが、IL-21においてもその発現がDNAメチル化により抑制されていることが明らかとなった。2.IL-21遺伝子プロモーター領域のCpGモチーフDNAメチル化の解析:bisulfite処理法によりNODマウスとC57BL/6マウスのT細胞ゲノムDNAのCpGモチーフメチル化を解析した。C57BL/6マウスと比べ、いくつかのCpGモチーフがNODマウスではメチル化されていないことが判明した。それぞれのIL-21遺伝子のプロモーター領域の塩基配列を解読したところ、このメチル化パターンの相違の多くはCpG部分のSNPが原因であることが判明した。3.IL-21転写活性化に及ぼすCpGメチル化の解析:それぞれのマウスのIL-21遺伝子プロモーター領域をレポータープラスミドにクローニングした。in vitroでCpGメチル化したレポータープラスミドをマウスT細胞株に導入し、PMAとIonomycinで刺激し転写活性化を解析した結果、NODマウス由来のレポーター遺伝子活性化がC57BL/6マウス由来のものよりやや高くなる傾向はみられたが、明らかな差異は認められなかった。

IL-21 has many biological activities, and its control mechanism is unknown. Autoimmune diabetes mellitus has been reported on the possibility of increased production of IL-21 and the proliferation of self-reactive T cells. This research focuses on the control mechanism and characteristics of the IL-21 legacy NOD Mashiko. DNA メチル化によるエピジェネティックなcontrol system についてanalyticsした. 1. The effects of the chemical inhibitor 5-azaza-C (5-aza-C) on the first day of the first year, and IL-21 on the first day of the 21st year of the 21st century, are the same. PMA's ionomycine stimulates マウスTリンパRL♂1に5-aza-Cをadded and IL-21の発appears to be hyperactive. Generally speaking, the control field of DNA modification and suppression of DNA production and IL- 21においてもその発appears がDNAメチル化により suppresses されていることが明らかとなった. 2. Analysis of IL-21 genetic material in the field of CpG DNA modification: bisulfite treatment Method of analysis of C57BL/6 DNA of NOD cells in T cell DNA CpG. C57BL/6マウスと比べ、いくつかのCpGモチーフがNODマウスではメチル化されていないことが见明した.それぞれIL-21 缝子のプロモーター区の塩综合arrayを解読したところ、このThe reason why the メチル化パターンの不多くはCpG part of the SNP is clearly understood. 3. Analysis of IL-21 activation and activation of CpG: それぞれのマウスのIL-21 remains of the プロモーターfield をレポータープラスミドにクローニングした. in In vitroでCpGメチル化したレポータープラスミドをマウスT cell line introducedし、PMAとIonomycinでstimulationし転activationをanalysisした results, The origin of NODマウスのレポーターactivated rootがC57BL/6マウスのものよりやや高くなる tend to はみられたが, 明らかなdifferent はcognize められなかった.