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クロマチンインスレーターによるエピジェネティック制御と病態解明

染色质绝缘子的表观遗传调控和病理学阐明

基本信息

批准号：
18659088
负责人：
中尾光善
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659088/
关键词：
ゲノム遺伝子発現制御発生・文化癌クロマチン

项目摘要

核内のゲノムは多数のドメインに区画されることで、個々の遺伝子に固有の発現制御がなされている。ゲノム上のドメイン間の境界配列(インスレーター)が重要な役割を果たしており、インスレーター結合タンパク質CTCFで認識されている。CTCFがクロマチンリモデリング因子CHD8と協働して、インスレーター機能(とくにエンハンサー遮断効果)を果たすことを報告した。CTCF-CHD8複合体が、ゲノムインプリンティングを受けるH19-IGF2領域の発現制御に不可欠であることを報告した。1.CTCF複合体の構成因子の同定CTCFの各種ドメインを用いた酵母2ハイブリッド法でcDNAライブラリーをスクリーニングし、現在までに、CHD8を含む数個のクロマチン因子を同定した。2. CTCFと結合分子の相互作用の解析同定した結合分子の発現ベクターおよび特異的な抗体を作製した。大腸菌で作製したリコンビナントタンパク質を用いたin vitroの結合実験で検討した。3. CTCFと結合分子のRNAiによるノックダウンCTCFおよび結合分子の発現ベクターおよび特異的にノックダウンできるsiRNA(またはshRNA発現ベクター)を用いて、CTCF-CHD8複合体がH19-IGF2領域の発現制御に必要であることが明らかになった。4. CTCFの遺伝子発現およびゲノム上の位置の解析CTCFのノックダウン系を用いて、内因性の遺伝子群の発現解析およびクロマチン解析を行った。発現マイクロアレイを用いて、CTCFノックダウンで発現の変化する遺伝子を同定した。Chip-on-Chip法を用いて、CTCFのゲノム上の位置を明らかにした。遺伝子プロモーターとエンハンサーを組み込んだルシフエラーゼ発現ベクターにCTCF結合候補配列を挿入して、インスレーター活性を検討した。

In the core, most of the components are mapped out, and each component has its own inherent occurrence control. The boundary arrangement between the top and bottom lines is important to the understanding of the quality of CTCF. The CCF is a collaborative effort to improve the quality of the product. CTCF-CHD8 complex is reported to be the first to develop in the H19-IGF domain. 1. The identity of CTCF complex component factors. The identity of CTCF component factors is determined by yeast 2 and CHD8. 2. Analysis of the interaction between CTCF and binding molecules is consistent with the development of binding molecules and the production of specific antibodies Coliform bacteria are used in vitro and in combination. 3. CTCF-CHD8 complex is necessary for the development of H19-IGF2 domain. 4. Analysis of the position of CTCF's gene expression and its intrinsic gene expression It's the same thing as the original. Chip-on-Chip method is used in the middle, CTCF and its position is clear. The CTCF candidate list is included in the list.