インタ-ロイキン3レセプタ-cDNAを用いたサイトカインレセプタ-の解析

使用白细胞介素 3 受体 cDNA 分析细胞因子受体

• 批准号: 03833036
• 负责人: 米原 伸
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03833036/
• 关键词: インタ-ロイキン3; GMーCSF; インタ-ロイキン5; レセプタ-; モノクロ-ナル抗体

マウスILー3レセプタ-分子Aicー2Aとその類似膜蛋白質Aicー2Bの機能を明らかにすることを目的に、Aicー2A分子及びAicー2B分子に特異的なハムスタ-のモノクロ-ナル抗体を作製した。遺伝子組換えの技術を用いて、可溶性のAicー2AとAicー2B分子を調製し、アルメニアンハムスタ-に免疫した。そして、Aicー2Aに特異的モノクロ-ナル抗体HAとAicー2Bに特異的モノクロ-ナル抗体HBを得た。HAはILー3の高親和能レセプタ-に対する結合を抑制し、ILー3依存性増殖も抑制した。Aicー2A分子が機能的高親和能ILー3レセプタ-の構成成分であることが示された。HBはGMーCSF及びILー5の高親和能レセプタ-への結合を阻害した。Aicー2BがGMーCFS及びILー5の高親和能レセプタ-に共通な構成成分であることが明らかになった。また、HBがILー3の高親和能結合も一部抑制したことから、ILー3レセプタ-にはAicー2Aを構成成分とするものと、Aicー2Bを構成成分とする二種類の存在することが示唆された。次に免疫沈降実験を行って、ILー3レセプタ-とGMーCSFレセプタ-複合体の構造を解析した。HA及びHBは細胞表層から分子量120K(Aic2A)・63K・50K、及びMr130K(Aic2B)・75k・50Kの蛋白質複合体をそれぞれ免疫沈降した。放射能標識リガンドとの化学的架橋実験からMr120K・63K及びMr130K・75Kの分子がそれぞれILー3及びGMーCSFを結合する蛋白質である事は既に示唆されている。50Kの蛋白質はILー3及びGMーCSFレセプタ-複合体ではまだ報告されていない第三の構成成分である可能性が強く、興味深い。

The function of Aic-2A and Aic-2B molecules in IL-3 is clearly defined. The specific Aic-2A and Aic-2B molecules are used to produce antibodies. The use of soluble Aic-2A and Aic-2B molecules in molecular modulation is also discussed. Aic-2A specific antibody HA and Aic-2B specific antibody HB HA has high affinity for IL-3, which inhibits IL-3-dependent proliferation. Aic-2A molecule has a high affinity for IL-3. HB has high affinity for CSF and IL-5, which can inhibit the binding of CSF and IL-5. Aic-2B, GM-CFS and IL-5 have a high affinity for common components. The high affinity binding mechanism of IL-3 is partially inhibited by the presence of Aic-2A and Aic-2B. The structure of IL-3, GM-CSF and IL-3 protein complexes was analyzed. HA and HB protein complexes with molecular weights of 120K(Aic2A)·63K·50K and 130K(Aic2B)·75K·50K are found in the cell surface. The chemical bridging of radiolabeled molecules from Mr120K·63K to Mr130K·75K is shown in protein binding to IL-3 and GM-CSF. 50K protein IL-3 and GM-CSF complex is highly probable and interesting.

项目成果

Satoshi Takaki: "Identification of the second subunit of the murine interleukin-5 receptor:interleukin-3 receptor-like protein,AlC-2B is a component of the highaffinity interleukin-5 receptor" The EMBO Journal. 10. 2833-2838 (1991)

Satoshi Takaki：“鼠白细胞介素 5 受体第二亚基的鉴定：白细胞介素 3 受体样蛋白，AlC-2B 是高亲和力白细胞介素 5 受体的一个组成部分”EMBO 杂志。