虚血心筋障害におけるカルパインの関与に関する研究

钙蛋白酶参与缺血性心肌损伤的研究

• 批准号: 04670354
• 负责人: 吉田 謙一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670354/
• 关键词: カルパイン; 虚血; 虚血再潅流; 心筋障害

まず、ランゲンドルフ法によるラット摘出心臓の潅流系を確立し、CPK及び総蛋白量が虚血再潅流による心筋障害の指標となることを確認した。摘出心臓をホモジネート後、分別遠心して600g、10000g、100000g各々の沈殿(筋原線維・膜分画)と可溶性分画を得た。可溶性分画より、DEAE cellulose、phenyl Sepharoseにより、μ‐calpain、m‐calpain及び内因性インヒビターであるcalpastatinを分離、安定性の保たれた条件下での膜分画及び可溶性分画のcalpain及びcalpastatinの活性の測定法を確立した。虚血心筋のcalpain活性は、可溶性分画では上昇していたが、膜分画では有意の変化が見られなかった。いっぽう、虚血再潅流後、可溶性分画のcalpain活性は減少傾向(逸脱によると思われる)、膜分画のそれは上昇していた。虚血及び虚血再潅流によるcalpain活性の変化は、各々、Ca^<2+>チャンネル拮抗剤(verapamil)及びCa^<2+>キレーター(EGTA)により抑制されたことより、Ca^<2+>に依存したものであることが判明した。また、calpainに対する合成阻害剤(E64d)は各条件下のcalpain活性を抑制していた。部分精製calpainにより角膜分画に惹起される変化と同様の蛋白組成の変化(SDS-PAGE法)が、虚血再潅流心に観察されたが、虚血心には明らかでなかった。再潅流に伴うcalpain活性、蛋白組成及びCPK(総蛋白)逸脱のいずれも、calpain阻害剤(E64d)により抑制された。以上より、虚血及び虚血後再潅流に伴う細胞内Ca^<2+>の変化により、可溶性及び膜分画のcalpain活性が上昇し、膜分画の蛋白分解を通じて心筋障害が進展している可能性が示された。今後、早期虚血心の診断法等への応用が見込まれる。

まず、ランゲンドルフ法によるラット pick out the heart and the flow system をestablishedし、CPK And the amount of protein is an indicator of myocardial insufficiency and re-flow of deficient blood, and it is also confirmed by the patient. After extracting the heart muscle, separate 600g, 10000g, and 100000g of the heart muscle separately into soluble parts. Soluble separator, DEAE cellulose, phenyl Sepharose, μ-calpain, m-calpain, and endogenous calpastatin The determination method of membrane separation and soluble separation of calpain and calpastatin under conditions of isolation and stability has been established. The calpain activity of the heart muscle due to deficiency of blood, the rising of the soluble fraction, and the intentional change of the membrane fraction can be seen.いっぽう, after re-bleeding of deficient blood, the activity of soluble calpain tends to decrease (escaping によると思われる), and the membrane grading activity increases. Insufficient blood and re-flow of deficient blood can be used to correct the activity of calpain, each 々, Ca^<2+> antagonistic agent (verapamil) andびCa^<2+>キレーター(EGTA)により suppresses されたことより, Ca^<2+>にdepends on したものであることが clarifies した. The synthetic inhibitor of calpain and calpain (E64d) inhibits the activity of calpain under various conditions. Partially purified calpain is used to separate the cornea and cause changes in protein composition (S DS-PAGE method), deficient blood and then leaking heart are detected, and deficient blood heart is clear and clear. We then examined the calpain activity, protein composition, and CPK (protein) escape and calpain inhibitor (E64d) inhibition. The above-mentioned blood loss, blood deficiency, and blood loss after blood deficiency are accompanied by changes in intracellular Ca^<2+>, soluble content, and membrane separation. The activity of alpain is increased, and the protein decomposition of membrane separation is not blocked, and the possibility of progression of cardiac muscle disorders is not shown. From now on, the method of diagnosing early-stage hemorrhagic heart disease will be used in the future.

项目成果

Kenichi Yoshida.et al: "Myocardial Lesions induced after trauma and trewtment" Forens Su Int. 54. 181-189 (1992)

Kenichi Yoshida.et al：“创伤和治疗后诱发的心肌病变”Forens Su Int。

Kenichi Yoshida et al.: "Hislocremical study of culmodnlin in dog myocaidecl ischemia and sudden cardiuc deatl cases." Jpn Heart J. 33. 717-725 (1992)

Kenichi Yoshida 等人：“狗心肌缺血和心脏猝死病例中库莫德林的组织化学研究。”