サブトラクション/エクスプレッション法を用いた顆粒球機能分子の同走

使用减法/表达法同时移动粒细胞功能分子

• 批准号: 06670480
• 负责人: 本田 善一郎
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670480/
• 关键词: 顆粒分泌; カルシウムシグナル; Gq; IP3受容体; ダウンレギュレーション

本研究の目的はアフリカツメガエル卵母細胞の遺伝子発現システムとハイブリッドサブトラクションの二つのシステムを組み合わせて、炎症細胞活性化一顆粒放出を正、あるいは負に制御する未知の細胞内機能分子を探索することである。本年度はまず1)モデル受容体(血小板活性因子受容体)およびマスト細胞mRNAを卵母細胞に共発現させ、顆粒分泌の再構成システムを作成すること、2)すでにクローン化された機能素子をさらに共発現させて活性化の正負の制御をモニターしこのシステムの妥当性を確認すること、を行った。1)種々の機能的なアッセイ法をもちいて、シメガエル卵母細胞にcRNA,組織mRNAを安定に共発現できることを確認し、システムの最適化に成功した。マスト細胞株mRNAを発現させると10ng/卵母細胞のヒスタミンが合成され、顆粒分泌を通常のヒスタミン自動シール装置分析装置で測定できることが確認された(未発表)。2)さらに共発現させる遺伝子として情報変換分子であるGqおよびその変異体を作成して卵母細胞に発現させ、モデル受容体からのカルシウムシグナリング-分泌反応を測定し、同分子による正負の制御を検討した。検討の結果、Gq活性型分子(Watanabe,Waga,Honda et al.J.Biol.Chem.in press)はモデル受容体からのカルシウムシグナリング-分泌反応を完全に抑制し、その主たる機序はkey moleculeの一つであるIP3受容体のdown-regulationであることを発見した(Honda,et al.J.Biol.Chem.inpress)。この新しい知見はシステムの妥当性を確認すると共に、受容体脱感作、細胞のアネルギーの理解を深めることとなった。

The purpose of this study is to explore the mechanism of gene development in oocytes, and to explore the mechanism of activation of inflammatory cells and the mechanism of particle release. This year, the following items were included: 1) preparation of oocyte mRNA co-expression, granule secretion and reconstitution system for platelet-activated receptor (platelet-activated factor receptor); 2) confirmation of appropriateness of oocyte mRNA co-expression, granule secretion and reconstitution system for activated receptor and activation system. 1)The function of the oocyte was successfully optimized for the identification of cRNA and mRNA in oocytes. The expression of mRNA in cell lines was determined at 10ng/oocyte, and the expression of mRNA in oocytes was determined by an automatic analyzer (not shown). 2) A study of the regulation of the development of oocytes and the development of oocytes and the production of oocytes and their receptors by the detection of negative and homologous molecules. As a result of the study, Gq active molecules (Watanabe,Waga,Honda et al.J.Biol.Chem.in press) completely inhibited the down-regulation of IP3 receptors by inhibiting the down-regulation of IP3 receptors (Honda,et al. J. Biol. Chem. inpress). This new knowledge is based on the recognition of the appropriateness of the system, the understanding of the receptor and the failure of the cell.

项目成果

和賀,中村,本田,他: "Two distinct signal transduction pathways for the activation of guinea pig macrophages and neutrophilss by endotosin" Biochem.Biophys.Res.Comnum.197. 465-472 (1994)

Waga、Nakamura、Honda 等人：“内毒素激活豚鼠巨噬细胞和中性粒细胞的两种不同信号转导途径”Biochem.Biophys.Res.Comnum.197（1994）。

高野,本田,他: "Role of cyteeplamic tail phosphorylation site of platelet-actiuating factor reseptor in agomist-induced desensitigation" The Journal of Biological chemistry. 269. 12722-12730 (1994)

Takano, Honda 等人：“血小板激活因子受体的细胞质尾部磷酸化位点在激动剂诱导的脱敏中的作用”《生物化学杂志》269。12722-12730 (1994)。

尾藤,本田,他: "Cloning,expression,and tissue distsibution of rat platalet-activating factor receptor eDNA." Europian Journal of Biochemistry. 221. 211-218 (1994)

Bito, Honda 等人：“大鼠血小板激活因子受体 eDNA 的克隆、表达和组织分布。”欧洲生物化学杂志 221. 211-218 (1994)

渡辺,和賀,本田 他。: "Prostaglaudin F2α stimulates formation of the p21^<ras>-GTP conplex and mitogen-activated protein kinase activity in NIH-3T3 cells." The Journal of Biological chemistry. (in press). (1995)

渡边、和贺、本田等人。

本田 他: "Gq pathway desensitiges Chemotactic Receptor-induced calcium signaling via Inositol Trisphosphate Receptor Downregulation" The Jornal of Biological chemistry. (in press). (1995)

Honda 等人：“Gq 通路通过肌醇三磷酸受体下调使趋化受体诱导的钙信号传导脱敏”，《生物化学杂志》（1995 年出版）。