シナプス伝達におけるグルタミン酸充填量制御メカニズムの構造生物学的解明とその応用

突触传递中谷氨酸负荷控制机制的结构生物学阐明及其应用

• 批准号: 25253008
• 负责人: 森山 芳則
• 金额: $ 28.29万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25253008/
• 关键词: 生化学; トランスポーター; グルタミン酸; ATP; シナプス小胞; 塩素イオン; ケトン体; 化学伝達

"【１】Cl-とケトン体結合部位の同定：VGLUTについて、次の2つを実施した。（１）３D構造上、Arg184の近傍に位置する10箇所のアミノ酸残基のアラニン置換体と、ループ領域内の10箇所のアラニン置換体を調製した。これまでに、グルタミン酸輸送におけるCl-とケトン体・グリオキシル酸による影響を半数のVGLUT変異体で測定した。（２）調製した高純度VGLUT2タンパク質とHPLCならびに質量分析計を用い、Cl-並びにケトン体・グリオキシル酸でブロックされるDIDSの結合部位を化学修飾法により決定することを試みている。本年度は昨年のこっていた残り１０種類の変異体の解析を終了した。さらに高純度VGLUT2を調整し、HPLCと質量分析機を用いてDIDS結合部位を複数決定した。その内の二種類がCl-ならびにアセト酢酸およびグリオキシル酸でブロックされた。【２】アロステリック効果による構造変化とモノマー／オリゴマー変換の実証N末端領域に蛍光性タンパク質AmCyanあるいはEYFPを融合したβ-EYFP-VGLUT-αまたはβ-AmCyan-VGLUTαを調製し、モノ・オリゴマー変換をFRETにより測定した。ケトン体とCl-によりVGLUT2のテトラマーならびにモノマー変換がおこることを実証した。さらにVNUT (vesicular nucleotide transporter, VNUT)でも同様の蛍光性精製タンパク質を調製し、テトラマーならびにモノマー変換がおこらないことを見いだした。実際におこらないのか起こっているがdetection limit以内なのかという対照実験を遂行中である。【３】 細菌のVGLUTホモログの３.５オングストロームで結晶構造を解いた。さらにラットVGLUT2の結晶を調製できた。【４】VNUTの特異的かつ可逆的かつ最強の阻害剤を開発した。輸送活性阻害と量子放出効果がパラレルであることを証明した。"

"[1] Cl- (1) In 3D structure, 10 amino acid residues located near Arg184 were modulated. Half of the VGLUTs were measured for the effects of chlorine and chlorine on acid transport. (2) Preparation of high-purity VGLUT2 by mass spectrometry, HPLC, mass spectrometry, Cl-binding, and chemical modification of DIDS binding sites. This year, the analysis of 10 kinds of foreign languages has been completed. High purity VGLUT2 was adjusted, HPLC and mass analyzer were used to determine the binding sites of DIDS. There are two kinds of compounds in the system: Cl-, Cl-and Cl-. [2] N-terminal domain optical properties AmCyan EYFP fusion β-EYFP-VGLUT-α modulation β-AmCyan-VGLUTα modulation VGLUT2's name is VGLUT2, and VGLUT2's name is VGLUT2. In addition, VNUT (vesicular nucleotide transporter) has the same optical properties, such as modulation, modulation, and modulation. In the meantime, the detection limit is within the limit. [3] Bacterial VGLUT crystal structure analysis of 3.5 ° C. VGLUT2 crystal is modulated. [4] VNUT's special reversible resistance is the strongest resistance. The transport activity and quantum emission are proved. "

项目成果

タバコにおけるアルカロイドトランスポーターの組織発現解析

烟草生物碱转运蛋白的组织表达分析

• 发表时间: 2014
• 作者: Cornette R;Iwata K;Gusev O;Hatanaka R;Okada J;Kikawada T;Okuda T;士反伸和，林田南帆，南翔太，森田匡彦，Alain GOOSSENS，Dirk INZE，森山芳則，守安正恭，矢崎一史
• 通讯作者: 士反伸和，林田南帆，南翔太，森田匡彦，Alain GOOSSENS，Dirk INZE，森山芳則，守安正恭，矢崎一史

Evaluation of the potency of telaprevir and its metabolites as inhibitors of renal organic cation transporters, a potential mechanism for elevation of serum creatinine.

评估特拉匹韦及其代谢物作为肾脏有机阳离子转运蛋白抑制剂的效力，肾有机阳离子转运蛋白是血清肌酐升高的潜在机制。

• 发表时间: 2013
• 期刊: Drug Metab Pharmacokinet.
• 作者: Nakada T;Kito T;Inoue K;Masuda S;Inui KI;Matsubara K;Moriyama Y;Hisanaga N;Adachi Y;Suzuki M;Yamada I;Kusuhara H.
• 通讯作者: Kusuhara H.

神経細胞における小胞型ヌクレオチドトランスポーターの局在と機能

神经元中囊泡核苷酸转运蛋白的定位和功能

• 作者: Nakamura K;Sano S;Fuster JJ;Kikuchi R;Shimizu I;Ohshima K;Katanasaka Y;Ouchi N;Walsh K.;日浅未来 et al.
• 通讯作者: 日浅未来 et al.

カチオン性薬物の腎尿細管分泌における有機カチオントランスポーター（OCT2、 MATE1,MATE2-K）の機能評価

有机阳离子转运蛋白（OCT2、MATE1、MATE2-K）在肾小管分泌阳离子药物中的功能评价

• 发表时间: 2013
• 作者: 鬼頭朋子;伊藤澄人;木本 恵美;Yurong Lai;井上勝央;湯浅博昭; 森山芳則;杉山雄一;楠原洋之
• 通讯作者: 楠原洋之

MATE 型薬物輸送トランスポーターの薬物相互作用

MATE型药物转运蛋白的药物相互作用

• 发表时间: 2013
• 作者: 表弘志;川嵜達也;伊東秀之;森山芳則
• 通讯作者: 森山芳則