組換えを起しやすい反復配列に結合するタンパクの分離

分离与易于重组的重复序列结合的蛋白质

• 批准号: 03267202
• 负责人: 木南 凌
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03267202/
• 关键词: 組換え; ミニサテライト; DNA結合タンパク

染色体にはミニサテライトやテロメアのような縦列型反復配列が存在し、この反復配列は相同組換えに起因する遺伝的不安定性を示し易い。中でもミニサテライトPc‐1、Pc‐2は一世代当り数%という高頻度の組換え変異を示し、組換えのhot spotとしての機能をもつと示唆されている。その組換えに寄与する一つのcis‐因子としてGGCAGG配列モチ-フを見い出したが、このモチ-フの機能を知るためにDNA構造の特徴および特異的に結合する蛋白質の有無を検討した。Pc‐2(6)を合成プロ-ブとし、サウスウェスタンブロッティング法でマウスの核抽出液(FM3A細胞)中の35kDaの蛋白質(Msbp‐4)を検出した。Pc‐2変異DNAを作製し、Msbp‐4の性質を検討する。精製には、ヘパリンカラム、PM‐G(6)DNAアフィニチ-カラム(Msbp‐4は結合しない)、Pc‐2DNA‐アフィニティ-カラムを用いてMsbp‐4を精製した。Msbp‐4をFM3A細胞からほぼ単一バンドにまで精製した。それは一本鎖DNAのcytosine‐rich鎖(Pc‐1(5)‐C、Pc‐2(6)‐C)に特異的に結合する性質を持っていた。Pc‐2の点変異DNA PM‐1C(6)(CGCAGGA)_6、PM‐3G(6)(GGGAGGA)_6、PM‐3T(6)(GGTAGGA)_6、PM‐5C(6)(GGCACGA)_6に対しては結合能が低下し、塩基配列特異性が示された。また、Msbp‐4はリン酸化を受けており、脱リン酸化によって結合能が変化することが示された。一方、テロメアの組換え変異については、生体内の体細胞では起こりにくく、培養体細胞の細胞分裂の間に起こり易いことが分かった。これは培養化すると、相同組換えの抑制機構がはずれ易くなることを示唆している。

Chromosome repeat alignment exists, and the instability of chromosome repeat alignment due to the same composition is shown. In the middle of the game, PC-1 and PC-2 are replaced by a generation when the number of % is high, and the hot spot of the group is changed. The presence or absence of a protein is discussed in relation to the composition and function of a cis-factor. The 35kDa protein (Msbp-4) was isolated from the nuclear extract (FM3A cells) of Pc-2(6). Pc-2 variant DNA processing, Msbp-4 properties are discussed Refined, Msbp-4 FM3A cells were refined from a single cell line. The specific binding properties of cytosine‐rich locks (Pc‐1(5)‐C, Pc‐2(6)‐C) of DNA are maintained. Pc-2 variant DNA PM-1C(6)(CGCAGGA)_6, PM-3G(6)(GGGAGGA)_6, PM-3T (6)(GGTAGGA)_6, PM-5C(6)(GGCACGA)_6 showed low binding energy and low nucleotide alignment specificity. Msbp-4 is a complex enzyme that binds to the enzyme. A party, a group of different groups, a somatic cell in vivo, a cell division in culture The same group of inhibition mechanisms are used in culture.

项目成果

Yamazaki Hajime: "A 35kd protein binding to cytosineーrich strand of hypervariable minisatellite DNA." J.Biol.Chem.(1992)

Yamazaki Hajime：“与富含胞嘧啶的高变小卫星 DNA 链结合的 35kd 蛋白质。”J.Biol.Chem.(1992)

Suzuki Satoshi: "Quercetin induces recombinational mutations in cultured cells as detected by DNA fingerprinting." Jpn.J.Cancer Res.82. 1061-1064 (1991)

Suzuki Satoshi：“通过 DNA 指纹识别检测，槲皮素会在培养细胞中诱导重组突变。”